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yokina

新虫 (初入文坛)

[求助] 标准曲线终点荧光信号值不一样怎么回事? 已有1人参与

做的四个10倍稀释的梯度,第三梯度信号值太低了,第四梯度完全没有信号了……跪求大神们帮帮忙!

标准曲线终点荧光信号值不一样怎么回事?


@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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许彦

木虫 (正式写手)

说明你设计的反应灵敏度不好。

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2016-05-17 05:36:40
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yokina

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 许彦 at 2016-05-17 05:36:40
说明你设计的反应灵敏度不好。

需要怎么再优化呢?

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3楼2016-05-17 06:38:13
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许彦

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yokina at 2016-05-17 06:38:13
需要怎么再优化呢?
...

这个我不会,我是做技术支持的,不是做研发的,我说的也只是一种可能,可以考虑换个高效的酶

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4楼2016-05-18 07:07:39
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
罗氏的仪器,可以直接问技术支持啊。
建议:1. 标准曲线,如果是相对定量的,可以使用2倍,5倍梯度稀释5个点,3重复,你这就单反应不严谨。
2. 看下试剂是不是过期了
3. 待检样本怎么样?说清楚地还能稍微帮你分析下,就直接一张图,找到原因才怪。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

有你真好
5楼2016-05-18 14:19:37
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cencheng

新虫 (小有名气)

6楼2016-05-18 22:23:20
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cencheng

新虫 (小有名气)

7楼2016-05-18 22:23:49
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yokina

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by a314919473 at 2016-05-18 14:19:37
罗氏的仪器,可以直接问技术支持啊。
建议:1. 标准曲线,如果是相对定量的,可以使用2倍,5倍梯度稀释5个点,3重复,你这就单反应不严谨。
2. 看下试剂是不是过期了
3. 待检样本怎么样?说清楚地还能稍微帮你分 ...

是taqman的绝对定量,打算做双探针的多重Pcr,模板用的两种puc质粒的混合,之前单重的时候还好好的。。。

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8楼2016-05-19 13:01:27
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

这个探针法多重PCR没有接触过,不过原理上完全可行。
无论是预实验还是正式实验都建议使用三重复,试剂很便宜的一个反应成本就是1-2元。
探针法都有这种通病就是平台期不会在一起,可以使用饱和染料做下,效果会好些。
有你真好
9楼2016-05-19 15:06:56
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love_st

金虫 (著名写手)


探针不行,浓度梯度下不去,重新设计下吧,
10楼2016-05-19 15:37:53
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