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sh727986091

金虫 (小有名气)

[求助] 构建重组质粒转化到大肠DH5a感受态中 已有2人参与

DH5a转化后培养21h才长出1-2个菌落,是怎么回事,这会是阳性结果吗?菌落还很小,只是一个小点。
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18716248350

新虫 (小有名气)

有时候要看你质粒,之前我导一个质粒培养了1夜多没长我就扔了,做了很多次都没做出来。后来我上上周又做,把平板放37摄氏度放了3天,我都以为不会长了,结果先于阴影长了两个出来,我就把两个挑出来密集划12格那种小的密集划线长出来后接到液体中提质粒,居然提出来了。所以你把那个菌等它再长大点试试。有可能是成功的,但是前提是阴性没有长

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9楼2016-05-17 19:11:47
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安静de执着14

新虫 (著名写手)

这个原因应该挺多吧,比如你的抗生素浓度太大,或者你的质粒没有构建成功,或者是假阳性等。是不是你要的结果,挑单菌落培养,然后提质粒酶切就好了。

发自小木虫Android客户端
2楼2016-05-16 09:41:07
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030Selma

金虫 (正式写手)

3楼2016-05-16 10:12:10
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守望海贝

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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sh727986091: 金币+3, ★★★很有帮助 2016-05-17 18:24:47
感受态细胞不行或者抗生素加多了,可以挑菌落培养后提取质粒进行PCR和酶切、测序鉴定,若正确的话,后续需要表达蛋白什么的,把提取的质粒重新转新的感受态细胞,挑单菌落培养菌液,保菌
4楼2016-05-16 10:53:40
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