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evil丶zero

金虫 (小有名气)

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[求助] 您好，请问用PCR的方法在基因后面加50个碱基，引物后面有5... 已有3人参与

您好，请问用PCR的方法在基因后面加50个碱基，引物后面有50个碱基不配对，这样做行得通么？ @gyesang

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1楼 2016-05-15 10:41:43

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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

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专业: 生物化学

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多出的50个碱基不用设计在一对引物里，可以设置3对引物，每条多加20bp左右，扩3次不就好了

2楼2016-05-16 10:29:53

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laolun

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

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行得通，只要配对的地方至少有12bp以上，一般问题不大。但是这样总长度就超过60bp了，最好是要求引物合成公司用长PAGE胶帮你纯化。

3楼2016-05-16 12:21:07

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张凡云

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可以的，做同源敲除就是这样

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4楼2016-05-17 08:54:46

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jujianqi

新虫 (初入文坛)

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没问题，我这样做的时候一般是引物配对的碱基有20bp以上。

5楼2016-05-17 14:34:35

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