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evil丶zero

金虫 (小有名气)

[求助] 您好,请问用PCR的方法在基因后面加50个碱基,引物后面有5... 已有3人参与

您好,请问用PCR的方法在基因后面加50个碱基,引物后面有50个碱基不配对,这样做行得通么? @gyesang

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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
多出的50个碱基不用设计在一对引物里,可以设置3对引物,每条多加20bp左右,扩3次不就好了
2楼2016-05-16 10:29:53
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laolun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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行得通,只要配对的地方至少有12bp以上,一般问题不大。但是这样总长度就超过60bp了,最好是要求引物合成公司用长PAGE胶帮你 纯化。
3楼2016-05-16 12:21:07
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)

可以的,做同源敲除就是这样

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4楼2016-05-17 08:54:46
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jujianqi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没问题,我这样做的时候一般是引物配对的碱基有20bp以上。
5楼2016-05-17 14:34:35
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