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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于pbi121表达载体构建中的菌落pcr问题。
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不温柔的温柔

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于pbi121表达载体构建中的菌落pcr问题。 已有1人参与

我构建的是基因沉默载体，正反向片段是从psk切下来的，连接转化后做的菌落pcr，引物是35sF和R1，退火温度是57℃，引物R1的TM值是69.6度，跑胶后发现正对照有条带，二十多个样和负对照都没有条带，引物二聚体很亮，我想知道是因为退货温度的问题，还是我挑的克隆不行？

@youlinglyw 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2016-05-12 11:22:14
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以再设计一对探针P一下看看。菌落，如果连接转化没问题，20多个都是阴性的可能性还是挺低的。
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2楼2016-05-12 11:29:15
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不温柔的温柔

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2016-05-12 11:29:15
可以再设计一对探针P一下看看。菌落，如果连接转化没问题，20多个都是阴性的可能性还是挺低的。

探针P是什么意思

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3楼2016-05-12 12:05:09
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不温柔的温柔

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2016-05-12 11:29:15
可以再设计一对探针P一下看看。菌落，如果连接转化没问题，20多个都是阴性的可能性还是挺低的。

我现在特想知道35s引物的tm值，可是查不到

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4楼2016-05-12 12:09:13
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这个是可以自己设计的。你也可以重新设计一对跟你下游引物Tm值接近的
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5楼2016-05-12 21:24:09
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