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sdjnyxn123

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达效果验证,必须要用纯化过的上清或者复性后的沉淀吗? 已有1人参与

直接破碎后的上清可不可以进行效果验证呢?

因为纯化效果一直不理想,想先看看不纯化的效果如何
不纯化的话是不是只是不能排除那些非目的蛋白的影响啊?这样的话做个不加诱导剂做对照的组就可以了吧
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

不知道你要验证啥,验证表达量直接破碎上清和沉淀分别SDS-PAGE,验证酶活直接菌体就可以。祝顺利

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2016-05-16 10:17:45
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030Selma

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2016-05-16 10:17:45
不知道你要验证啥,验证表达量直接破碎上清和沉淀分别SDS-PAGE,验证酶活直接菌体就可以。祝顺利

请问一下菌体如何验证酶活?

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-05-16 10:21:55
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

菌体验证酶活:
1、直接离心收集菌体,用反应缓冲液重悬后,加入底物反应,然后检测底物产物。
2.破碎后,用上清和沉淀,分辨用反应缓冲液溶解,加入底物反应然后检测。
就这两种。我做过很多重组酶的反应检测。祝顺利
4楼2016-05-16 10:56:14
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sdjnyxn123

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2016-05-16 10:17:45
不知道你要验证啥,验证表达量直接破碎上清和沉淀分别SDS-PAGE,验证酶活直接菌体就可以。祝顺利

感谢老师解答,我是为了做抑菌实验的,但是目前无论是菌体还是上清还是沉淀都没有表现出抑菌活性(纸片法和牛津杯法看不到明显的抑菌圈)

但是纯化不出来
所以现在考虑是先做完纯化还是考虑其他的工作
5楼2016-05-16 17:58:56
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