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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 蛋白表达效果验证，必须要用纯化过的上清或者复性后的沉淀吗？
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sdjnyxn123

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达效果验证，必须要用纯化过的上清或者复性后的沉淀吗？ 已有1人参与

直接破碎后的上清可不可以进行效果验证呢？

因为纯化效果一直不理想，想先看看不纯化的效果如何
不纯化的话是不是只是不能排除那些非目的蛋白的影响啊？这样的话做个不加诱导剂做对照的组就可以了吧
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1楼 2016-05-09 09:59:27
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030Selma

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2016-05-16 10:17:45
不知道你要验证啥，验证表达量直接破碎上清和沉淀分别SDS-PAGE，验证酶活直接菌体就可以。祝顺利

请问一下菌体如何验证酶活？

发自小木虫IOS客户端
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3楼2016-05-16 10:21:55
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

不知道你要验证啥，验证表达量直接破碎上清和沉淀分别SDS-PAGE，验证酶活直接菌体就可以。祝顺利
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sdjnyxn123
2楼2016-05-16 10:17:45
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

菌体验证酶活：
1、直接离心收集菌体，用反应缓冲液重悬后，加入底物反应，然后检测底物产物。
2.破碎后，用上清和沉淀，分辨用反应缓冲液溶解，加入底物反应然后检测。
就这两种。我做过很多重组酶的反应检测。祝顺利
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4楼2016-05-16 10:56:14
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sdjnyxn123

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2016-05-16 10:17:45
不知道你要验证啥，验证表达量直接破碎上清和沉淀分别SDS-PAGE，验证酶活直接菌体就可以。祝顺利

感谢老师解答，我是为了做抑菌实验的，但是目前无论是菌体还是上清还是沉淀都没有表现出抑菌活性（纸片法和牛津杯法看不到明显的抑菌圈）

但是纯化不出来
所以现在考虑是先做完纯化还是考虑其他的工作
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5楼2016-05-16 17:58:56
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