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pSG5质粒进行BamHI和BglII双酶切如何酶切完全？ 已有1人参与
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pSG5质粒上EcorI、BamHI和BglII三个酶切位点是连在一起的，GAATTCGGATCCAGATCT，现在我要做BamHI和BglII双酶切，用的NEB的内切酶双酶切2h，之后用T4 连接酶连接后得到的大量空载质粒，挑了16个菌都是空载，所以怀疑是不是由于酶切位点连在一起，对双酶切有影响，导致酶切不完全？不过，我也有怀疑T4连接体系配置有问题 看了论坛资料后说可以分别单酶切，把需要保护碱基长一点的酶先切，然后再切保护碱基短一点的，查到NEB这两个酶的保护碱基是这样的，好像如果只剩一个残基情况下都比较难切，请问这种情况下怎么办比较好呢？  求大侠赐教啊 |
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kangaroo0513
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2楼2016-05-07 21:23:52