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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 相似性很高的基因如何敲除
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8095172666

银虫 (小有名气)

[求助] 相似性很高的基因如何敲除 已有2人参与

最近在做酵母细胞基因的敲除，三个基因FLO1、FLO5、FLO9，三个基因的相似性非常高。实验室一直用的都是同源重组的方法，找的flo1的同源臂几乎在另外两个基因中都可以配对上。现已将一个flo1上下游同源臂的带卡纳抗性的敲片成功导入细胞，且可在抗性平板上生长。但是由于这三个基因的相似度极高，会不会有这样的可能，敲片最后是在细胞内的另外两个基因上同源重组了。有没有什么方法可以检验的？
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1楼 2016-05-04 16:38:43
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-04 22:01:04
确实很难。我试过lentiCrispr，感觉不如同源重组踏实。不知楼主什么原因也不用？我现在同源重组，只把最前端ATG附近的部分稍微去掉一点，应该可以达到目的了。不知楼主ATG离基因5‘以外的部分有多远，其实重组掉一小部分即可。
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8095172666
4楼2016-05-09 22:05:48
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原海亮

木虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2016-06-04 22:00:42
同源臂不可以调整么？

发自小木虫Android客户端
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天空才是极限，我有信心飞的更高！
2楼2016-05-04 17:07:33
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8095172666

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-05-04 17:07:33
同源臂不可以调整么？

整个基因的相似度都非常高，找不到差异性比较大的同源臂啊
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3楼2016-05-04 19:50:50
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8095172666

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by junior850621 at 2016-05-09 22:05:48
确实很难。我试过lentiCrispr，感觉不如同源重组踏实。不知楼主什么原因也不用？我现在同源重组，只把最前端ATG附近的部分稍微去掉一点，应该可以达到目的了。不知楼主ATG离基因5‘以外的部分有多远，其实重组掉一小 ...

我根据你的说法看了一下，但是最多只能保证上同源臂不同，下同源臂的相似性还是很高。如果是这样的话，还能准确的敲除吗？谢谢
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5楼2016-05-10 09:52:04
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