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8095172666银虫 (小有名气)
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相似性很高的基因如何敲除 已有2人参与
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| 最近在做酵母细胞基因的敲除，三个基因FLO1、FLO5、FLO9，三个基因的相似性非常高。实验室一直用的都是同源重组的方法，找的flo1的同源臂几乎在另外两个基因中都可以配对上。现已将一个flo1上下游同源臂的带卡纳抗性的敲片成功导入细胞，且可在抗性平板上生长。但是由于这三个基因的相似度极高，会不会有这样的可能，敲片最后是在细胞内的另外两个基因上同源重组了。有没有什么方法可以检验的？ |
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【答案】应助回帖
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-04 22:01:04
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-04 22:01:04
| 确实很难。我试过lentiCrispr，感觉不如同源重组踏实。不知楼主什么原因也不用？我现在同源重组，只把最前端ATG附近的部分稍微去掉一点，应该可以达到目的了。不知楼主ATG离基因5‘以外的部分有多远，其实重组掉一小部分即可。 |
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80951726664楼2016-05-09 22:05:48
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【答案】应助回帖
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建议做着试一下吧，这个不好说。曲高和寡，现在大家都喜欢吃快餐，lentiCrispr才这么流行，很多人也在骗自己这个没有off target。既然选择了做重组，就意味着更多工作量，但结果肯定令人信服。如果需要的话可以边做边跟我讨论。 发自小木虫Android客户端 |
6楼2016-05-10 13:53:13
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不知敲掉的外显子部分是多少bp，一般去掉不是三的整数倍的话可以造成移码。但你的情况比较特殊，第一个外显子去掉，后面确实可能还会表达截断体蛋白，难道你手头没有抗体吗？跑个蛋白胶，竖直方向裁膜，看有没有分子量小的蛋白表达。 发自小木虫Android客户端 |
9楼2016-06-05 01:27:52
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10楼2016-06-05 08:42:02