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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 两个小片段与载体连接
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荷岚102

新虫 (初入文坛)

[求助] 两个小片段与载体连接 已有2人参与

两个小片段分别为400bp和600bp，与载体连接，应该以多大的比例呢？有没有比较好一点的体系，我连了好久，一直连不上

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1楼 2016-05-03 19:00:33
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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by mars199026 at 2016-05-04 18:20:08
酶切酶连理论上可以，但是效率不高！比例不好掌握，建议你先用交叠pcr融合上再做连接

这样比较靠谱
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14楼2016-05-06 09:27:04
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何子919

银虫 (小有名气)
载体 DNA 和插入 DNA 的摩尔数比一般为： 0.03 pmol ： 0.03-0.3 pmol   我就是按照这个比例范围，每次都能连上。预祝成功。
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2楼2016-05-03 19:17:14
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荷岚102

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 何子919 at 2016-05-03 19:17:14
载体 DNA 和插入 DNA 的摩尔数比一般为： 0.03 pmol ： 0.03-0.3 pmol   我就是按照这个比例范围，每次都能连上。预祝成功。

两个片段同时连也行吗？

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3楼2016-05-03 19:22:03
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边木殇

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道你片段两端切口是什么样的，可以先两个小的连完在和大的连，同时连效率会很低吧
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4楼2016-05-03 19:53:29
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