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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 同尾酶Sau3AI-BamHI连接不上，有人碰到过么？
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矜天

木虫 (正式写手)

[交流] 同尾酶Sau3AI-BamHI连接不上，有人碰到过么？

用Thermo的Sau3AI（货名Bsp143I）部分酶切基因组DNA，胶回收3~6kb的片段，连接到takara的pUC118 BamHI/BAP载体，电转，板上什么也没长。
用的连接酶是takara的，新开的。

作为对照的有
正对照1：某环状质粒，转化1.5ng，长满板。
正对照2：BamHI酶切相同的基因组DNA，回收同样大小的片段，按照相同的摩尔比例连接同样的载体，电转25ng，涂板50ul长约100个白斑。
阴性对照：感受态直接涂板，不长。

问题来了，这个酶切是切开了，但是粘性末端和BamHI不匹配？可是这个方法已经挺成熟了，也搜不到太多类似的问题。
刚打电话给Thermo客服，说今天答复我。累
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1楼 2016-04-29 10:12:26
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匿名
本帖仅楼主可见
2楼2016-04-29 10:20:10
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

kungfu2016

新虫 (正式写手)
那就改用化转法

发自小木虫Android客户端
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3楼2016-04-30 22:57:22
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