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矜天木虫 (正式写手)
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[交流]
同尾酶Sau3AI-BamHI连接不上，有人碰到过么？
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用Thermo的Sau3AI（货名Bsp143I）部分酶切基因组DNA，胶回收3~6kb的片段，连接到takara的pUC118 BamHI/BAP载体，电转，板上什么也没长。 用的连接酶是takara的，新开的。 作为对照的有 正对照1：某环状质粒，转化1.5ng，长满板。 正对照2：BamHI酶切相同的基因组DNA，回收同样大小的片段，按照相同的摩尔比例连接同样的载体，电转25ng，涂板50ul长约100个白斑。 阴性对照：感受态直接涂板，不长。 问题来了，这个酶切是切开了，但是粘性末端和BamHI不匹配？可是这个方法已经挺成熟了，也搜不到太多类似的问题。 刚打电话给Thermo客服，说今天答复我。累  |
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kungfu2016
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