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PCR木有条带 求解！！！ 已有1人参与
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第一次的体系：30ul cDNA的260/280:1.60 Taq pcr mix 15ul ddH2O 8.6ul F（10uM） 1.2ul R（10uM） 1.2ul cDNA（1200ug/ul） 4ul 95摄氏度 2min 95摄氏度 30s 50摄氏度 30s 72摄氏度 1min 重复34次 72摄氏度 10min 4度保存 跑胶用1.2%的琼脂凝胶 条带如下（最左和最右是10000bp的marker）：  第二次的体系：30ul cDNA的260/280:1.61 金牌 mix 27ul F（10uM） 1ul R（10uM） 1ul cDNA（1200ug/ul） 1.2ul 98摄氏度 2min 98摄氏度 10s 55摄氏度 10s 72摄氏度 1min 重复30次 72摄氏度 5min 4度保存 跑胶用1%的琼脂凝胶 条带如下 （最右6个是我的样）：  两次都没有条带 送公司也反馈木有条带 请问大家是问什么?哪一步有问题？ |
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2016-04-28 20:18:05, 364.42 K
2016-04-28 20:18:40, 130.65 K
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4楼2016-04-29 12:27:06
感谢参与，应助指数 +1
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2楼2016-04-28 20:52:41
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谢谢大神 起初我也觉得dna的质量有点弱 浓度倒是没有考虑过 我第一次pcr阔增的片段大概2000bp左右 第二次大概都是600左右 退火温度是根据公司反馈的数据取得平均值 不知道持续时间怎么定？ 发自小木虫IOS客户端 |
3楼2016-04-29 10:35:34
5楼2016-04-29 15:31:33