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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 关于DNA序列上的酶切位点问题
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kingjazz23

金虫 (小有名气)

[求助] 关于DNA序列上的酶切位点问题 已有1人参与

最近在构建载体，将找好的目的基因序列插入载体中，发现有时候将DNA序列complete reverse之后，酶切位点也会发生变化，与没有reverse时之前的不同，我想问问在这样的情况下，怎样选择酶切位点？是不是要将两种情况的酶切都排除了，选择序列上没有的酶切位点？还有就是想问一下DNA序列reverse之后，转录和翻译出来的蛋白和之前的是同一种吗？
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1楼 2016-04-28 14:10:33
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
载体上序列转录、翻译是有方向的，你插入正向序列与插入反向互补序列结果肯定不同。一般限制性内切酶的识别切割位点都是回文序列，应该不会出现正反链酶切位点信息不一致的情况。把序列贴上来看下。
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2楼2016-04-28 18:43:54
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kingjazz23

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-04-28 18:43:54
载体上序列转录、翻译是有方向的，你插入正向序列与插入反向互补序列结果肯定不同。一般限制性内切酶的识别切割位点都是回文序列，应该不会出现正反链酶切位点信息不一致的情况。把序列贴上来看下。

我说的complete reverse不是指反向互补连 而是指我用DNA star的Editseq把原本的序列倒转个方向 就是头尾对调 不是指互补连

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3楼2016-04-28 23:17:01
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kingjazz23 at 2016-04-28 23:17:01
我说的complete reverse不是指反向互补连 而是指我用DNA star的Editseq把原本的序列倒转个方向 就是头尾对调 不是指互补连
...

DNA链是有方向的，酶识别时也是有方向的，做酶切位点分析时，按照5‘→3’输入即可，不用考虑反向序列。
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4楼2016-04-28 23:52:43
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kingjazz23

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2016-04-28 23:52:43
DNA链是有方向的，酶识别时也是有方向的，做酶切位点分析时，按照5‘→3’输入即可，不用考虑反向序列。...

想这两个序列 第一个是我从genebank上复制下来的 他ORF的方向是向左的 我把它完全的反向 就是头尾反过来 变成第二张图 它的酶切位点就发生变化了 不知道为什么
关于DNA序列上的酶切位点问题


关于DNA序列上的酶切位点问题-1



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5楼2016-04-29 08:24:52
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by kingjazz23 at 2016-04-29 08:24:52
想这两个序列 第一个是我从genebank上复制下来的 他ORF的方向是向左的 我把它完全的反向 就是头尾反过来 变成第二张图 它的酶切位点就发生变化了 不知道为什么


...

应该反向互补，不是反向，你做错了。
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6楼2016-04-29 10:51:57
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kingjazz23

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by stone2239 at 2016-04-29 10:51:57
应该反向互补，不是反向，你做错了。...

感觉这里说不明白，你方便给我QQ或者其他联系方式吗？
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7楼2016-04-29 11:01:19
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轩辕漪

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
8楼2016-04-30 09:28:03
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