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5566589

新虫 (初入文坛)

[求助] 第一次做荧光PCR,一直失败 已有5人参与

我们组只有我一个做荧光PCR的,第一次做空白的水也有扩增曲线,如图。。。求问是因为引物有二聚体吗
Amplification Plot.jpg
Melt Curve.jpg

第一次做荧光PCR,一直失败
Amplification Plot.jpg


第一次做荧光PCR,一直失败-1
Melt Curve.jpg
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solomon7811

新虫 (小有名气)

SYBR荧光PCR对引物设计要求比较高。溶解曲线貌似双峰,前一个峰感觉像是二聚体的,后一个峰值还是很高的感觉不像二聚体。且CT值还是很小的。建议调整下引物和SYBR的浓度看看。

发自小木虫Android客户端
16楼2016-05-01 11:23:57
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查看全部 18 个回答

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
水最好用荧光染料试剂盒中自带的Rnase-free的水,如果有污染也会出现这样的情况。另外溶解曲线单峰型没有,引物特异性不高,建议重设计引物
2楼2016-04-27 21:23:29
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5566589

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-27 21:23:29
水最好用荧光染料试剂盒中自带的Rnase-free的水,如果有污染也会出现这样的情况。另外溶解曲线单峰型没有,引物特异性不高,建议重设计引物

谢谢谢谢,水就是自带的,我再换个引物试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2016-04-27 21:41:58
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z631535213

木虫 (正式写手)

用的ROX还是什么啊,学习中

发自小木虫IOS客户端
4楼2016-04-27 23:08:19
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