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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 第一次做荧光PCR，一直失败
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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5566589

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 第一次做荧光PCR，一直失败 已有5人参与

我们组只有我一个做荧光PCR的，第一次做空白的水也有扩增曲线，如图。。。求问是因为引物有二聚体吗
Amplification Plot.jpg
Melt Curve.jpg

第一次做荧光PCR，一直失败
Amplification Plot.jpg


第一次做荧光PCR，一直失败-1
Melt Curve.jpg
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1楼 2016-04-27 19:56:40
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solomon7811

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
SYBR荧光PCR对引物设计要求比较高。溶解曲线貌似双峰，前一个峰感觉像是二聚体的，后一个峰值还是很高的感觉不像二聚体。且CT值还是很小的。建议调整下引物和SYBR的浓度看看。

发自小木虫Android客户端
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16楼2016-05-01 11:23:57
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卡维斯

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
水最好用荧光染料试剂盒中自带的Rnase-free的水，如果有污染也会出现这样的情况。另外溶解曲线单峰型没有，引物特异性不高，建议重设计引物
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2楼2016-04-27 21:23:29
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5566589

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-27 21:23:29
水最好用荧光染料试剂盒中自带的Rnase-free的水，如果有污染也会出现这样的情况。另外溶解曲线单峰型没有，引物特异性不高，建议重设计引物

谢谢谢谢，水就是自带的，我再换个引物试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2016-04-27 21:41:58
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z631535213

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
用的ROX还是什么啊，学习中

发自小木虫IOS客户端
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4楼2016-04-27 23:08:19
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