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Carson同学

新虫 (初入文坛)

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[求助] 双重PCR外面的长的目的条带扩不出来已有1人参与

只用外面的一对引物扩增时条带特异单一很亮，但是加进另两条引物做（分别跟外面那对引物的上游和下游结合）双重PCR扩增时就只有里面较小的两条目的条带，外面的长的目的条带就不见了，这是怎么回事，应该怎么办？
我用的25微升体系，外面的引物上下游各加了2微升，里面的引物上游和下游各加1微升(分别跟外引物上下游结合)用的天根的mix

@biostar2009 @youlinglyw @飞约疯人院 @wizardfan 发自小木虫IOS客户端

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1楼 2016-04-25 20:14:53

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菜头Q

铜虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

不知道你说的双重PCR是不是巢式啊……还有引物位置能不能画个图简略表示一下。如果单纯从PCR条件这块分析的话，建议你把退火温度根据每个引物的Tm值设置成梯度试试；从PCR体系这块来看我觉得你的引物加的有问题，就相当于中间设置了不可跨越的拦截，没办法收到信号一个道理。

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2楼2016-04-25 20:30:10

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Carson同学

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 菜头Q at 2016-04-25 20:30:10
不知道你说的双重PCR是不是巢式啊……还有引物位置能不能画个图简略表示一下。如果单纯从PCR条件这块分析的话，建议你把退火温度根据每个引物的Tm值设置成梯度试试；从PCR体系这块来看我觉得你的引物加的有问题，就 ...

对，套式的