应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 双重PCR外面的长的目的条带扩不出来
61/1返回列表
查看: 1353  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Carson同学

新虫 (初入文坛)

[求助] 双重PCR外面的长的目的条带扩不出来 已有1人参与

只用外面的一对引物扩增时条带特异单一很亮，但是加进另两条引物做（分别跟外面那对引物的上游和下游结合）双重PCR扩增时就只有里面较小的两条目的条带，外面的长的目的条带就不见了，这是怎么回事，应该怎么办？
我用的25微升体系，外面的引物上下游各加了2微升，里面的引物上游和下游各加1微升(分别跟外引物上下游结合)用的天根的mix

@biostar2009 @youlinglyw @飞约疯人院 @wizardfan 发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-04-25 20:14:53
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

菜头Q

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道你说的双重PCR是不是巢式啊……还有引物位置能不能画个图简略表示一下。如果单纯从PCR条件这块分析的话，建议你把退火温度根据每个引物的Tm值设置成梯度试试；从PCR体系这块来看我觉得你的引物加的有问题，就相当于中间设置了不可跨越的拦截，没办法收到信号一个道理。
赞一下 回复此楼
2楼2016-04-25 20:30:10
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Carson同学

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 菜头Q at 2016-04-25 20:30:10
不知道你说的双重PCR是不是巢式啊……还有引物位置能不能画个图简略表示一下。如果单纯从PCR条件这块分析的话，建议你把退火温度根据每个引物的Tm值设置成梯度试试；从PCR体系这块来看我觉得你的引物加的有问题，就 ...

对，套式的
双重PCR外面的长的目的条带扩不出来



发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-04-25 22:38:22
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

菜头Q

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Carson同学 at 2016-04-25 22:38:22
对，套式的

...

套式PCR的话肯定是有两步组成的，第一步就是你图中F1和R1为引物，特异性扩增较长的片段；第二步建议你分别加入F1/R2和R1/F2做成两个体系，分别得到以第一步产物为模板的第二步的产物，而不能同时把三对引物都放进去。
赞一下 回复此楼
4楼2016-04-26 14:02:30
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yfd900825

银虫 (正式写手)
不懂你的目的是什么?_?要得到比较长的F1 R1的片段产物吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2016-04-27 22:29:50
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Carson同学

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yfd900825 at 2016-04-27 22:29:50
不懂你的目的是什么?_?要得到比较长的F1 R1的片段产物吗？

对，F1与R1的条带扩不出来，但是单独扩的时候能出来

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-04-28 07:30:19
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Liam1913 的主题更新
61/1返回列表
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 3/150 2026-09-15 10:02 by VMDqgnlKimtZ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 09:38 by VMDqgnlKimtZ
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:58 by C79jjtjAKjEn
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:14 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:14 by C79jjtjAKjEn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 08:02 by C79jjtjAKjEn
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:58 by C79jjtjAKjEn
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:34 by C79jjtjAKjEn
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 6/300 2026-09-15 07:14 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 07:02 by 5BDX0d0WFp7t
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:50 by 5BDX0d0WFp7t
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:01 by 5BDX0d0WFp7t
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-15 05:49 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:45 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭