24小时热门版块排行榜    

查看: 1434  |  回复: 13

1379452403

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR体系

PCR体系一般根据什么确定啊,10,20,50ul体系有什么不同啊,其中的各个温度和时间怎么确定啊,都依据什么啊,跪求大神指导啊,小菜鸟跪求啊

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

red-bri

新虫 (小有名气)

看你的目的,一般检测下,20ul足够,要是回收条带的话,50ul。

发自小木虫Android客户端
3楼2016-04-22 17:08:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

半仙0356

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看你自己要做多少东西咯,

发自小木虫Android客户端
2楼2016-04-22 16:34:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1379452403

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 半仙0356 at 2016-04-22 16:34:14
看你自己要做多少东西咯,

时间怎么设呢,跟酶有关吗

发自小木虫Android客户端
4楼2016-04-22 18:39:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1379452403

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by red-bri at 2016-04-22 17:08:38
看你的目的,一般检测下,20ul足够,要是回收条带的话,50ul。

时间怎么设呢,跟酶有关吗

发自小木虫Android客户端
5楼2016-04-22 18:39:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
对于一般的PCR程序,有两个参数很重要,一个是退火温度,这个与PCR引物有关,一般设置在引物Tm与(Tm-5)范围内;另一个是延伸时间,这个与产物大小有关,对于普通Taq酶,按每分钟1kb计算,可以稍长但不能短,对于特殊的快酶则视具体情况而定。
6楼2016-04-22 18:46:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

半仙0356

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 1379452403 at 2016-04-22 18:39:20
时间怎么设呢,跟酶有关吗
...

我做的是25μL体系,用的r Taq酶,目标产物是150bp,94度预变性5分钟,94度变性30S,退火30S,72度延伸30S,72度7分钟,循环为30~仅供参考

发自小木虫Android客户端
7楼2016-04-22 20:59:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王箬竹

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
pcr体系一般都是15微升,过多浪费样品和试剂,过少容易蒸干(一般如果只是做检测,我都会加液体石蜡,防蒸发),如果是要做切胶回收,测序,一般都是选择50体系。

发自小木虫Android客户端
8楼2016-04-22 22:21:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王箬竹

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
常规PCR: 变性温度一般94,退火温度根据你的引物的Tm值而定,延伸温度一般72度(特殊PCR各个温度根据需求定)

发自小木虫Android客户端
9楼2016-04-22 22:24:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王箬竹

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
变性时间一般30秒就够,退火时间20~30秒,延伸时间根据聚合酶的反应和扩增前段大小而定,酶的反应速度说明书上都有!祝好运

发自小木虫Android客户端
10楼2016-04-22 22:27:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 1379452403 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 11/550 2026-08-31 00:32 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 12/600 2026-08-31 00:31 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-31 00:21 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 3/150 2026-08-30 20:19 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 3/150 2026-08-30 20:10 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 19:37 by hZiFeudZyoGR
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 4/200 2026-08-30 19:13 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 19:01 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 18:53 by hZiFeudZyoGR
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 18:51 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:50 by hZiFeudZyoGR
[博后之家] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 18:28 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 9/450 2026-08-30 17:56 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +8 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 12/600 2026-08-30 17:11 by hZiFeudZyoGR
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
信息提示
请填处理意见