24小时热门版块排行榜    

查看: 1244  |  回复: 13

1379452403

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR体系

PCR体系一般根据什么确定啊,10,20,50ul体系有什么不同啊,其中的各个温度和时间怎么确定啊,都依据什么啊,跪求大神指导啊,小菜鸟跪求啊

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

red-bri

新虫 (小有名气)

看你的目的,一般检测下,20ul足够,要是回收条带的话,50ul。

发自小木虫Android客户端
3楼2016-04-22 17:08:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

半仙0356

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看你自己要做多少东西咯,

发自小木虫Android客户端
2楼2016-04-22 16:34:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1379452403

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 半仙0356 at 2016-04-22 16:34:14
看你自己要做多少东西咯,

时间怎么设呢,跟酶有关吗

发自小木虫Android客户端
4楼2016-04-22 18:39:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1379452403

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by red-bri at 2016-04-22 17:08:38
看你的目的,一般检测下,20ul足够,要是回收条带的话,50ul。

时间怎么设呢,跟酶有关吗

发自小木虫Android客户端
5楼2016-04-22 18:39:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
对于一般的PCR程序,有两个参数很重要,一个是退火温度,这个与PCR引物有关,一般设置在引物Tm与(Tm-5)范围内;另一个是延伸时间,这个与产物大小有关,对于普通Taq酶,按每分钟1kb计算,可以稍长但不能短,对于特殊的快酶则视具体情况而定。
6楼2016-04-22 18:46:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

半仙0356

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 1379452403 at 2016-04-22 18:39:20
时间怎么设呢,跟酶有关吗
...

我做的是25μL体系,用的r Taq酶,目标产物是150bp,94度预变性5分钟,94度变性30S,退火30S,72度延伸30S,72度7分钟,循环为30~仅供参考

发自小木虫Android客户端
7楼2016-04-22 20:59:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王箬竹

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
pcr体系一般都是15微升,过多浪费样品和试剂,过少容易蒸干(一般如果只是做检测,我都会加液体石蜡,防蒸发),如果是要做切胶回收,测序,一般都是选择50体系。

发自小木虫Android客户端
8楼2016-04-22 22:21:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王箬竹

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
常规PCR: 变性温度一般94,退火温度根据你的引物的Tm值而定,延伸温度一般72度(特殊PCR各个温度根据需求定)

发自小木虫Android客户端
9楼2016-04-22 22:24:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王箬竹

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
变性时间一般30秒就够,退火时间20~30秒,延伸时间根据聚合酶的反应和扩增前段大小而定,酶的反应速度说明书上都有!祝好运

发自小木虫Android客户端
10楼2016-04-22 22:27:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 1379452403 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +7 18419759900 2026-03-25 7/350 2026-03-26 16:07 by 不吃魚的貓
[考研] 材料科学与工程 317求调剂 +4 JKSOIID 2026-03-26 4/200 2026-03-26 15:58 by 不吃魚的貓
[考研] 279 分 求调剂 +3 睡个好觉_16 2026-03-24 3/150 2026-03-26 15:43 by zzll406
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 8/400 2026-03-25 20:34 by 热情沙漠
[考研] 求b区院校调剂 +4 周56 2026-03-24 5/250 2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 329求调剂 +3 钮恩雪 2026-03-25 3/150 2026-03-25 14:43 by 糖加冰
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 材料学硕,求调剂 6+4 糖葫芦888ll 2026-03-22 9/450 2026-03-25 11:19 by greychen00
[考研] 289求调剂 +9 怀瑾握瑜l 2026-03-20 9/450 2026-03-25 11:02 by userper
[考研] 318求调剂 +5 plum李子 2026-03-21 8/400 2026-03-25 09:26 by aa331100
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生(材料、化学、电化学,环境) +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 求调剂一志愿海大,0703化学学硕304分,有大创项目,四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 求调剂 +7 Auroracx 2026-03-22 7/350 2026-03-22 12:38 by 素颜倾城1988
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
信息提示
请填处理意见