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逸影冰

铁虫 (小有名气)

[求助] 同样的条件,第一天标准品样品出峰都挺正常的,第二天峰就发生分裂了。如图 已有7人参与

做的是生物碱的液相,流动相用的磷酸缓冲盐(pH=9):乙腈=55::45,同样的条件,第一天标准品样品出峰都挺正常的,第二天峰就发生分裂了。如图
    峰发生分裂的原因是柱子或者泵头脏了吗?还是流动相有问题,磷酸缓冲盐每天都是重新配的,还是说pH=9的缓冲液对柱子(C18)造成伤害,柱效降低了?
到底是什么原因,求大神指导

同样的条件,第一天标准品样品出峰都挺正常的,第二天峰就发生分裂了。如图
IMG正常的峰.jpg


同样的条件,第一天标准品样品出峰都挺正常的,第二天峰就发生分裂了。如图-1
IMG分裂峰.jpg
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柳絮虫

新虫 (职业作家)

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感谢参与,应助指数 +1
可能是进样样品量偏高了,减少进样量看看。特别是标准品,没杂质,常常会出现峰分裂。再者,每次开机,关机都需要冲洗柱子,才能获得比较良好的重现性。
2楼2016-04-15 18:42:01
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416301116

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们实验室有过类似的情况,问题就是在柱子和流动相上了,可以重新配置流动相试一下或者把柱子好好冲洗一下,再重新运行,还不行的话,就换一根新柱子。
加油
5楼2016-04-17 15:32:03
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halibotejin

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
小伙伴,你把色谱图信息放全了,建议你看一下你色谱柱pH的耐受性,将色谱柱重新冲一下。再进一针看一下。
7楼2016-04-18 10:48:27
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robot473

铜虫 (初入文坛)

好专业啊,顶一顶。是不是样浓度高了?

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8楼2016-04-18 11:47:36
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xjh199089

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 逸影冰 at 2016-04-18 15:31:17
进样量是10μL,应该不算多吧 。我的就是标准品,不知道为什么会峰分裂...

我们以前是因为流动相有气泡,建议用超声波多超一会,排气多排一会

发自小木虫IOS客户端
18楼2016-04-18 19:15:57
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dinosaurfly

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
24楼: Originally posted by 逸影冰 at 2016-04-20 18:28:50
进的是标准品,已过滤。流动相pH不是一般要比样品pKa大或小2个单位吗?但是我的标准品不同浓度的pH还不一样,,...

标准品配样是用的纯甲醇吗,如果配样溶剂和流动相不一致也会造成这种情况,当然你第一天这是这么配制的对吧,如果是基本排除了这个因素;另一个就是你的柱效下降了,pH1.5-9的色谱柱确实不太适合pH9的流动相长期使用,最好柱子的耐受pH值最高在10或12较好;我想知道你用的流动相是配在一块还是单独放在两个瓶子里呢,如果pH9的磷酸盐单独放在一个流动相瓶中,一天时间内连续进样磷酸盐可能会长菌,造成色谱柱柱头污染,那么这样也会造成峰分叉的情况;至于过滤的问题,以前对照品和样品都过滤吗,特别是样品,如果不过滤也会造成色谱柱污染,柱效下降!
酒困路长惟欲睡,日高人渴漫思茶!
25楼2016-04-21 08:59:27
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普通回帖

hydros

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
减少进样量,或者PH稍微调大一点。
3楼2016-04-16 22:07:07
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咆哮诗人

木虫 (正式写手)

我感觉是柱子不行了!你看看柱子的ph范围多大啊?

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爱拼才会赢!
4楼2016-04-17 09:35:21
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sgz311

新虫 (正式写手)

6楼2016-04-17 16:09:11
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小_雨_点

金虫 (小有名气)

我感觉是你的原料的问题,比如里边有吸水了,有其他溶剂加入了

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向着太阳前进!
9楼2016-04-18 12:23:26
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逸影冰

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 柳絮虫 at 2016-04-15 18:42:01
可能是进样样品量偏高了,减少进样量看看。特别是标准品,没杂质,常常会出现峰分裂。再者,每次开机,关机都需要冲洗柱子,才能获得比较良好的重现性。

进样量是10μL,应该不算多吧 。我的就是标准品,不知道为什么会峰分裂
10楼2016-04-18 15:31:17
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