应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助，引物设计的相关问题若干，关于酶切位点的保护碱基的。
51/1返回列表
查看: 2583  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

kaoyanjiu

新虫 (小有名气)

[交流] 求助，引物设计的相关问题若干，关于酶切位点的保护碱基的。 已有5人参与

做PCR，根据我的目的序列设计引物，我的上游引物加入XhoⅠ酶切位点，5‘端的保护碱基应该怎么设计呢？下游的是Not I酶切位点，这个位点应该加什么样的保护碱基呢？
我在网上查找也只找到如图这样的列表，我需要加多少个，有什么种类要求吗？
顺便说一下我的模版是反转的cDNA。

求助，引物设计的相关问题若干，关于酶切位点的保护碱基的。
保护碱基表.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-04-14 12:37:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

醉_梦

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
最好还是采用中间载体最好，引物就不用加保护碱基。PCR产物酶切实在效率低且不易判断是否成功
赞一下 回复此楼
8楼2016-04-17 16:17:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
加保护碱基的目的是方便后面酶切。
如果PCR后不是直接用于酶切连接的，比如先连T载体的，可以不加保护碱基；直接用PCR产物酶切连接的，要在引物的5‘端加保护碱基，为了保证酶切效率，建议按照保护碱基表上酶切效率高的加。
赞一下 回复此楼
2楼2016-04-15 09:23:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王箬竹

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
求助，引物设计的相关问题若干，关于酶切位点的保护碱基的。-1

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2016-04-16 00:31:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王箬竹

新虫 (小有名气)
找切割效率高的保护碱基

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-04-16 00:32:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 4/200 2026-08-30 03:26 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 02:09 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:49 by ZPa0EcMwuECS
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:47 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-30 01:03 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-30 00:41 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 国社科申报系统有变化 +3 kynobel 2026-08-23 3/150 2026-08-29 21:57 by 余韵清
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 9/450 2026-08-29 09:59 by jklily
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 09:26 by G6APbkg8SA6w
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭