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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 请教一个关于质粒提取的问题，不甚感激！
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恰好

木虫 (小有名气)

[求助] 请教一个关于质粒提取的问题，不甚感激！ 已有2人参与

各位大侠，请教一个关于质粒提取的问题。构建好目的基因的载体转化大肠杆菌后，挑阳性克隆摇菌，提取质粒，电泳显示质粒呈弥散拖尾状，而平行提取的空载体质粒正常。转化的载体是卡那抗性，在抗生素培养基上生长正常，而且用其质粒扩增目的片段也能得到正确大小的片段。请问有人遇到过这种情况吗？为什么提取的质粒会是这个样子呢？（电泳图如下，左边两孔是空载体质粒，其余是转化后单克隆质粒，marker是DL5000）。不甚感激！

请教一个关于质粒提取的问题，不甚感激！
2016-4-13 SCR 1-14 vector 12 plasmid.jpg
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1楼 2016-04-13 14:05:21
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gxx2lm

木虫 (正式写手)
加RNA酶了吗，质粒浓度是不是太高，减少上样量试试

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2楼2016-04-13 21:53:41
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恰好

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gxx2lm at 2016-04-13 21:53:41
加RNA酶了吗，质粒浓度是不是太高，减少上样量试试

加RNA酶了啊，质粒浓度不算高，400-500ng/uL，上样量4uL。而且空载体质粒和转化后质粒是同一批提取质粒的，所以应该也不是操作或试剂的问题。
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3楼2016-04-13 22:21:42
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十比

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是污染的菌，所以根本就没的提出质粒，所以赶快重新做才是上策。
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4楼2016-04-14 14:54:49
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
（其质粒扩增目的片段也能得到正确大小的片段？）楼主有加阴性对照吗？
楼上正解，是污染的菌，你里面根本没质粒。
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采菊东篱下，悠然见南山。
5楼2016-04-14 15:01:35
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恰好

木虫 (小有名气)
好的，谢谢大家的回复！PCR没加阴性对照，但我同时用载体引物和片段引物扩增都得到大小一致的片段。
那我再重做试试。
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6楼2016-04-17 12:02:02
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shx0743

新虫 (正式写手)
你这个好奇怪，希望你成功之后告诉大家是怎么回事！

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7楼2016-04-17 12:23:40
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