24小时热门版块排行榜    

查看: 1171  |  回复: 6

恰好

木虫 (小有名气)

[求助] 请教一个关于质粒提取的问题,不甚感激! 已有2人参与

各位大侠,请教一个关于质粒提取的问题。构建好目的基因的载体转化大肠杆菌后,挑阳性克隆摇菌,提取质粒,电泳显示质粒呈弥散拖尾状,而平行提取的空载体质粒正常。转化的载体是卡那抗性,在抗生素培养基上生长正常,而且用其质粒扩增目的片段也能得到正确大小的片段。请问有人遇到过这种情况吗?为什么提取的质粒会是这个样子呢?(电泳图如下,左边两孔是空载体质粒,其余是转化后单克隆质粒,marker是DL5000)。不甚感激!

请教一个关于质粒提取的问题,不甚感激!
2016-4-13 SCR 1-14 vector 12 plasmid.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gxx2lm

木虫 (正式写手)

加RNA酶了吗,质粒浓度是不是太高,减少上样量试试

发自小木虫Android客户端
2楼2016-04-13 21:53:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恰好

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gxx2lm at 2016-04-13 21:53:41
加RNA酶了吗,质粒浓度是不是太高,减少上样量试试

加RNA酶了啊,质粒浓度不算高,400-500ng/uL,上样量4uL。而且空载体质粒和转化后质粒是同一批提取质粒的,所以应该也不是操作或试剂的问题。
3楼2016-04-13 22:21:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

十比

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是污染的菌,所以根本就没的提出质粒,所以赶快重新做才是上策。
4楼2016-04-14 14:54:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
(其质粒扩增目的片段也能得到正确大小的片段?)楼主有加阴性对照吗?
楼上正解,是污染的菌,你里面根本没质粒。
采菊东篱下,悠然见南山。
5楼2016-04-14 15:01:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恰好

木虫 (小有名气)

好的,谢谢大家的回复!PCR没加阴性对照,但我同时用载体引物和片段引物扩增都得到大小一致的片段。
那我再重做试试。
6楼2016-04-17 12:02:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shx0743

新虫 (正式写手)

你这个好奇怪,希望你成功之后告诉大家是怎么回事!

发自小木虫Android客户端
7楼2016-04-17 12:23:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 恰好 的主题更新
信息提示
请填处理意见