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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 求助：Qiagen试剂盒提取RNA，提取结果分析
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雪落如默

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助：Qiagen试剂盒提取RNA，提取结果分析 已有2人参与

我用Qiagen的病毒RNA提取试剂盒（QIAamp Viral RNA Mini Kit）提的病毒RNA，严格按照试剂盒说明书进行操作，提取后用NanoDrop 2000分光光度计进行RNA浓度测定，结果显示如图。
      1%琼脂糖凝胶检测没有条带，有没有哪位大神可以帮忙分析一下可能的原因？
      已重复多次，样品也换过多次，结果基本一致，260：280高得非常不正常，求助各大神！

求助：Qiagen试剂盒提取RNA，提取结果分析
D4-1.png@biostar2009
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1楼 2016-03-29 13:13:07
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long20081990

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉上是降解了啊，跑胶都没条带了，降解完了吧都感觉。
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雪落如默
2楼2016-03-29 16:22:14
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雪落如默

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by long20081990 at 2016-03-29 16:22:14
感觉上是降解了啊，跑胶都没条带了，降解完了吧都感觉。

担心是跑胶过程中才发生的降解～因为跑胶用的缓冲液都不是严格使用DHPC处理过的水配制的。如果是提取的RNA全部降解了，那260位置的峰值应该是什么呢？100多的浓度又是啥咧？

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3楼2016-03-30 02:06:03
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宏伟10

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DNA的吸光度比单链RNA的吸光度低，单链RNA的吸光度是不是又比单个核苷酸的吸光度低呢？核酸在260有个吸收峰是因为碱基上的环状结构
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开心是福
4楼2016-03-31 01:13:39
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solomon7811

新虫 (小有名气)
直接RT—PCR试试。

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5楼2016-03-31 17:54:45
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雪落如默

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 宏伟10 at 2016-03-31 01:13:39
DNA的吸光度比单链RNA的吸光度低，单链RNA的吸光度是不是又比单个核苷酸的吸光度低呢？核酸在260有个吸收峰是因为碱基上的环状结构

意思是RNA降解以后的单个核苷酸在260的吸收峰比RNA高，才导致比值高的么？

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6楼2016-04-08 11:18:42
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雪落如默

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by solomon7811 at 2016-03-31 17:54:45
直接RT—PCR试试。

已经尝试过了，5’端p出来的效果不太好，有时甚至p不出来，就想确定一下是不是RNA本身就有问题？

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7楼2016-04-08 11:21:57
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宏伟10

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 雪落如默 at 2016-04-08 11:18:42
意思是RNA降解以后的单个核苷酸在260的吸收峰比RNA高，才导致比值高的么？
...

是的，很可能降解了，260有吸收峰，说明里面有碱基，但是无条带，如果排除核酸跑出胶，那就只能说明吸光的是核苷酸上面的碱基，而不是核酸上的。

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开心是福
8楼2016-04-08 12:26:10
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松风山人

铜虫 (小有名气)
降解了呀

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9楼2016-04-08 12:38:00
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1yangz

新虫 (初入文坛)
QIAGEN盒，包括52904和74104低价出售，另有gibco胎牛血清，Hyclone的细胞胰酶，抗生素，可有需要的？低价出售，可以顺丰到付

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10楼2016-04-10 01:17:11
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