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雪落如默

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助:Qiagen试剂盒提取RNA,提取结果分析 已有2人参与

我用Qiagen的病毒RNA提取试剂盒(QIAamp Viral RNA Mini Kit)提的病毒RNA,严格按照试剂盒说明书进行操作,提取后用NanoDrop 2000分光光度计进行RNA浓度测定,结果显示如图。
      1%琼脂糖凝胶检测没有条带,有没有哪位大神可以帮忙分析一下可能的原因?
      已重复多次,样品也换过多次,结果基本一致,260:280高得非常不正常,求助各大神!

求助:Qiagen试剂盒提取RNA,提取结果分析
D4-1.png@biostar2009
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long20081990

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
感觉上是降解了啊,跑胶都没条带了,降解完了吧都感觉。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2016-03-29 16:22:14
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雪落如默

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by long20081990 at 2016-03-29 16:22:14
感觉上是降解了啊,跑胶都没条带了,降解完了吧都感觉。

担心是跑胶过程中才发生的降解~因为跑胶用的缓冲液都不是严格使用DHPC处理过的水配制的。如果是提取的RNA全部降解了,那260位置的峰值应该是什么呢?100多的浓度又是啥咧?

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3楼2016-03-30 02:06:03
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宏伟10

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
DNA的吸光度比单链RNA的吸光度低,单链RNA的吸光度是不是又比单个核苷酸的吸光度低呢?核酸在260有个吸收峰是因为碱基上的环状结构
开心是福
4楼2016-03-31 01:13:39
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solomon7811

新虫 (小有名气)

5楼2016-03-31 17:54:45
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雪落如默

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 宏伟10 at 2016-03-31 01:13:39
DNA的吸光度比单链RNA的吸光度低,单链RNA的吸光度是不是又比单个核苷酸的吸光度低呢?核酸在260有个吸收峰是因为碱基上的环状结构

意思是RNA降解以后的单个核苷酸在260的吸收峰比RNA高,才导致比值高的么?

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6楼2016-04-08 11:18:42
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雪落如默

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by solomon7811 at 2016-03-31 17:54:45
直接RT—PCR试试。

已经尝试过了,5’端p出来的效果不太好,有时甚至p不出来,就想确定一下是不是RNA本身就有问题?

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7楼2016-04-08 11:21:57
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宏伟10

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 雪落如默 at 2016-04-08 11:18:42
意思是RNA降解以后的单个核苷酸在260的吸收峰比RNA高,才导致比值高的么?
...

是的,很可能降解了,260有吸收峰,说明里面有碱基,但是无条带,如果排除核酸跑出胶,那就只能说明吸光的是核苷酸上面的碱基,而不是核酸上的。

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开心是福
8楼2016-04-08 12:26:10
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松风山人

铜虫 (小有名气)

9楼2016-04-08 12:38:00
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1yangz

新虫 (初入文坛)


QIAGEN盒,包括52904和74104低价出售,另有gibco胎牛血清,Hyclone的细胞胰酶,抗生素,可有需要的?低价出售,可以顺丰到付

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10楼2016-04-10 01:17:11
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