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kissyubo

新虫 (初入文坛)

[求助] 转化后不表达 已有1人参与

用DH5菌第一次做表达PET质粒,提出的质粒浓度较低,接着第二次用DH5菌做PETX-4T和BL21菌做PGE质粒的表达,第二次转化后含抗性的平板根本就不长菌,第三次重复第二次的,结果还是一样的。其中过程都很仔细,可是就是转化后平板上不长菌?这是为什么呢?我怀疑第一,菌有问题。但是菌有问题这个怎么解决?如何鉴定呢?第二,氨苄抗性的问题,可能氨苄失效了。但是本宝宝的氨苄青霉素是新配的,而且0.22滤膜过滤了。第三操作问题,这个问题,为什么第一次做转化就成功了呢?而且跑电泳条带看起来还不错,怪就怪宝宝一时冲动,把所有东西都清洗了,没有留下一点痕迹。求大神指导。问题出在哪里?


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我就是我,颜色不一样的烟火
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kissyubo

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-03-27 16:47:11
1.是不是菌的问题,你可以在不加抗性的平板上涂下,看看能不能长出菌落。2.你的质粒上的抗性是氨苄,不是卡那或其他抗吧?3.感受态是同一批吗?有没有过期?

不知道是不是菌的问题,我不知道怎么办了..........之前都没有遇到过这种情况,感受太都是新做的,是具有氨苄抗性,这个没错!

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我就是我,颜色不一样的烟火
3楼2016-03-28 21:24:19
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.是不是菌的问题,你可以在不加抗性的平板上涂下,看看能不能长出菌落。2.你的质粒上的抗性是氨苄,不是卡那或其他抗吧?3.感受态是同一批吗?有没有过期?
2楼2016-03-27 16:47:11
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