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kissyubo新虫 (初入文坛)
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[求助]
转化后不表达 已有1人参与
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用DH5菌第一次做表达PET质粒，提出的质粒浓度较低，接着第二次用DH5菌做PETX-4T和BL21菌做PGE质粒的表达，第二次转化后含抗性的平板根本就不长菌，第三次重复第二次的，结果还是一样的。其中过程都很仔细，可是就是转化后平板上不长菌？这是为什么呢？我怀疑第一，菌有问题。但是菌有问题这个怎么解决？如何鉴定呢？第二，氨苄抗性的问题，可能氨苄失效了。但是本宝宝的氨苄青霉素是新配的，而且0.22滤膜过滤了。第三操作问题，这个问题，为什么第一次做转化就成功了呢？而且跑电泳条带看起来还不错，怪就怪宝宝一时冲动，把所有东西都清洗了，没有留下一点痕迹。求大神指导。问题出在哪里？  |
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kaobo2012
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2楼2016-03-27 16:47:11