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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化后不表达
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kissyubo

新虫 (初入文坛)

[求助] 转化后不表达 已有1人参与

用DH5菌第一次做表达PET质粒，提出的质粒浓度较低，接着第二次用DH5菌做PETX-4T和BL21菌做PGE质粒的表达，第二次转化后含抗性的平板根本就不长菌，第三次重复第二次的，结果还是一样的。其中过程都很仔细，可是就是转化后平板上不长菌？这是为什么呢？我怀疑第一，菌有问题。但是菌有问题这个怎么解决？如何鉴定呢？第二，氨苄抗性的问题，可能氨苄失效了。但是本宝宝的氨苄青霉素是新配的，而且0.22滤膜过滤了。第三操作问题，这个问题，为什么第一次做转化就成功了呢？而且跑电泳条带看起来还不错，怪就怪宝宝一时冲动，把所有东西都清洗了，没有留下一点痕迹。求大神指导。问题出在哪里？
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我就是我，颜色不一样的烟火
1楼 2016-03-27 09:05:24
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.是不是菌的问题，你可以在不加抗性的平板上涂下，看看能不能长出菌落。2.你的质粒上的抗性是氨苄，不是卡那或其他抗吧？3.感受态是同一批吗？有没有过期？
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2楼2016-03-27 16:47:11
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kissyubo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-03-27 16:47:11
1.是不是菌的问题，你可以在不加抗性的平板上涂下，看看能不能长出菌落。2.你的质粒上的抗性是氨苄，不是卡那或其他抗吧？3.感受态是同一批吗？有没有过期？

不知道是不是菌的问题，我不知道怎么办了..........之前都没有遇到过这种情况，感受太都是新做的，是具有氨苄抗性，这个没错！

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我就是我，颜色不一样的烟火
3楼2016-03-28 21:24:19
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