应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 基因敲除，sacB负筛选的问题
51/1返回列表
查看: 3625  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yaya0922

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因敲除，sacB负筛选的问题 已有2人参与

改造的pK18mobsacB质粒具有氯霉素和卡那抗性，受体菌具有利福平抗性，进行同源重组，得到单交换菌株（具有氯霉素、卡那和利福平抗性），但是单交换菌株在平板上划线，不知道为什么四区只长一区？（划了两次都是这样，没有单菌落）。在LB中（含利福平）摇菌大约20h，涂到5%蔗糖培养基上，原液一片片的，像层膜，但10-1，,10-2，10-3未长，应该怎么办？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-03-27 08:58:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jueie

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大肠杆菌可以用RED同源重组来作敲除，比这个pK18高效
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yaya0922
now！
7楼2016-03-28 18:19:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

fenghan06

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
sacB反筛有些菌是做不出来的， 譬如大肠杆菌， 就有些菌种做得出， 有些菌做不出

换下培养基， LB里不加氯化钠试看看， 这个基本上在大肠杆菌里最好不加。 具体原因我也不是很清楚， 只是知道会影响实验， 本人猜是和某些使用钠离子为动力的antiporter efflux pump在有钠离子时候能排出蔗糖有关。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yaya0922
2楼2016-03-27 14:02:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fenghan06

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

真的还有问题建议使用rpsL150对streptomycin的抗性来做反筛

我做的结果是每五个单菌落就有一个是阳性结果， 教了几个现在实验室的博士生做也都分别在不同菌株里成功。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yaya0922
3楼2016-03-27 14:05:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fenghan06

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by fenghan06 at 2016-03-27 14:05:03
真的还有问题建议使用rpsL150对streptomycin的抗性来做反筛

我做的结果是每五个单菌落就有一个是阳性结果， 教了几个现在实验室的博士生做也都分别在不同菌株里成功。

但是这个是在大肠杆菌里做的
赞一下 回复此楼
4楼2016-03-27 14:05:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +3 holy J 2026-03-21 3/150 2026-03-21 21:33 by barlinike
[考研] 考研化学学硕调剂，一志愿985 +5 张vvvv 2026-03-15 7/350 2026-03-21 19:23 by ColorlessPI
[考研] 298求调剂 +4 上岸6666@ 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:14 by 学员8dgXkO
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[基金申请] 学校已经提交到NSFC，还能修改吗？ 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 268求调剂 +9 简单点0 2026-03-17 9/450 2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 299求调剂 +6 △小透明* 2026-03-17 6/300 2026-03-21 02:42 by JourneyLucky
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +12 墨墨漠 2026-03-18 13/650 2026-03-21 01:42 by JourneyLucky
[考研] 323求调剂 +3 洼小桶 2026-03-18 3/150 2026-03-20 22:54 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 +8 安全上岸！ 2026-03-16 8/400 2026-03-20 22:13 by luoyongfeng
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 5/250 2026-03-20 22:11 by 云游重阳
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +9 手机用户 2026-03-17 9/450 2026-03-20 14:24 by 无懈可击111
[考研] 286求调剂 +6 lemonzzn 2026-03-16 10/500 2026-03-19 14:31 by lemonzzn
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 0854，计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 生物学071000 329分求调剂 +3 我爱生物生物爱� 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:12 by macy2011
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭