应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 基因敲除，sacB负筛选的问题
111/2返回列表12下一页
查看: 3694  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yaya0922

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因敲除，sacB负筛选的问题 已有2人参与

改造的pK18mobsacB质粒具有氯霉素和卡那抗性，受体菌具有利福平抗性，进行同源重组，得到单交换菌株（具有氯霉素、卡那和利福平抗性），但是单交换菌株在平板上划线，不知道为什么四区只长一区？（划了两次都是这样，没有单菌落）。在LB中（含利福平）摇菌大约20h，涂到5%蔗糖培养基上，原液一片片的，像层膜，但10-1，,10-2，10-3未长，应该怎么办？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-03-27 08:58:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yaya0922

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by fenghan06 at 2016-03-27 14:02:32
sacB反筛有些菌是做不出来的， 譬如大肠杆菌， 就有些菌种做得出， 有些菌做不出

换下培养基， LB里不加氯化钠试看看， 这个基本上在大肠杆菌里最好不加。 具体原因我也不是很清楚， 只是知道会影响实验， 本人猜 ...

我做的这个菌要加氯化钠。以前做的这个菌其他基因敲除做出来过，当时得到许多回复突变的，说明sacB还是起作用了。

发自小木虫IOS客户端
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2016-03-27 17:39:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

trhgy

铁虫 (初入文坛)
我也用pk18mobsacb做啊，蔗糖筛选全是假阳性啊

发自小木虫IOS客户端
赞一下(3人) 回复此楼
10楼2018-08-22 17:34:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fenghan06

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

真的还有问题建议使用rpsL150对streptomycin的抗性来做反筛

我做的结果是每五个单菌落就有一个是阳性结果， 教了几个现在实验室的博士生做也都分别在不同菌株里成功。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yaya0922
3楼2016-03-27 14:05:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

fenghan06

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
sacB反筛有些菌是做不出来的， 譬如大肠杆菌， 就有些菌种做得出， 有些菌做不出

换下培养基， LB里不加氯化钠试看看， 这个基本上在大肠杆菌里最好不加。 具体原因我也不是很清楚， 只是知道会影响实验， 本人猜是和某些使用钠离子为动力的antiporter efflux pump在有钠离子时候能排出蔗糖有关。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yaya0922
2楼2016-03-27 14:02:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fenghan06

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by fenghan06 at 2016-03-27 14:05:03
真的还有问题建议使用rpsL150对streptomycin的抗性来做反筛

我做的结果是每五个单菌落就有一个是阳性结果， 教了几个现在实验室的博士生做也都分别在不同菌株里成功。

但是这个是在大肠杆菌里做的
赞一下 回复此楼
4楼2016-03-27 14:05:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yaya0922

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by fenghan06 at 2016-03-27 14:05:03
真的还有问题建议使用rpsL150对streptomycin的抗性来做反筛

我做的结果是每五个单菌落就有一个是阳性结果， 教了几个现在实验室的博士生做也都分别在不同菌株里成功。

谢谢你的建议！

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
6楼2016-03-27 17:41:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jueie

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大肠杆菌可以用RED同源重组来作敲除，比这个pK18高效
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yaya0922
now！
7楼2016-03-28 18:19:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yaya0922

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by jueie at 2016-03-28 18:19:36
大肠杆菌可以用RED同源重组来作敲除，比这个pK18高效

哦，谢谢。我的不是大肠杆菌

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-03-28 18:44:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

llm151789

新虫 (初入文坛)
请问你是怎么把氯霉素抗性基因加到pk18mobsacB

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2018-03-26 11:53:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yaya0922 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +9 drizzle_9 2026-04-12 10/500 2026-04-12 14:51 by drizzle_9
[考研] 求助调剂，跨调 +12 X十甫寸Y 2026-04-11 12/600 2026-04-12 10:20 by zhouyuwinner
[考研] 调剂 +10 月@163.com 2026-04-11 10/500 2026-04-12 09:14 by zhouyuwinner
[考研] 求调剂，262机械专硕 +8 嗯yyl 2026-04-08 8/400 2026-04-12 02:31 by 秋豆菜芽
[考研] 327求调剂 +5 拾光任染 2026-04-06 5/250 2026-04-12 02:29 by 秋豆菜芽
[考研] 化工调剂求导师收留！一志愿失利，踏实肯干，有植物提取科研经历 +20 yzyzx 2026-04-09 21/1050 2026-04-12 00:12 by 小小小小啦啦啦
[考研] 求调剂 +18 MAX怅惘 2026-04-09 20/1000 2026-04-11 23:31 by zhen～
[教师之家] 请问地理、遥感方面，可以做哪些横向项目啊，纵向完不成考核啊 +3 锦衣卫寒战 2026-04-07 5/250 2026-04-11 20:51 by 豫椒
[考研] 298求调剂 +5 残荷新柳 2026-04-07 5/250 2026-04-11 11:02 by 紫曦紫棋
[考研] 中药学调剂 初试324 +4 洋甘菊、 2026-04-10 6/300 2026-04-11 09:41 by gong120082
[考研] 085402通信工程调剂，有4项学科竞赛国奖（电赛国二），硕士研究生调剂自荐信。 +5 m永o不v言o弃m 2026-04-09 5/250 2026-04-11 09:33 by zhq0425
[考研] 083200 305分 求二轮调剂 不接受跨专业 +9 Claireyyyy 2026-04-09 10/500 2026-04-10 21:21 by Claireyyyy
[考研] 本9 一志愿西工大085601 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-10 16:57 by luoyongfeng
[考研] 机械专368 有去处吗 +4 种大树 2026-04-10 4/200 2026-04-10 15:31 by jiajinhpu
[考研] 296求调剂 +6 汪！？！ 2026-04-08 6/300 2026-04-10 11:02 by mattzhming
[考研] 求调剂希望还是希望在山河四省附近 +3 快乐的小白鸽 2026-04-05 3/150 2026-04-09 17:36 by wp06
[考研] 277、学硕，求调剂 数一104， +11 瓶子PZ 2026-04-07 12/600 2026-04-07 23:30 by 一只好果子?
[考研] 312求调剂 +18 gtw1 2026-04-06 20/1000 2026-04-07 18:16 by 蓝云思雨
[考研] 信工所11408 340分 本科西安交大自动化 +3 moontrek 2026-04-06 3/150 2026-04-07 09:56 by chongya
[考研] 287分求调剂 有专利国奖一志愿哈工大085406 +6 白易辰 2026-04-06 7/350 2026-04-06 22:46 by 875465
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭