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毛小毛脏兮兮

新虫 (初入文坛)

[求助] 用正向引物和反向引物测序,结果比对不一致是怎么回事

载体构建,把一段序列 连接在1300s-GFP载体上,用的是同源重组法,挑了单克隆以后选取了阳性进行测序。在插入的片段上游的载体上选择一段序列作为正向引物,在片段的下游载体上选择一段序列作为反向引物,进行测序。用正向引物的测序结果与序列比对有许多碱基匹配不上,而反向引物测序的结果却又能匹配上,是什么原因?
测序的样品是质粒,这样的结果算构建成功了么?
图片是是分别用正反向引物测序以后比对的结果。最后一张图示载体示意图,插入的序列紧挨 GFP的ATG,在ATG 和KpnⅠ之间。
求大神指教>0<  感激不尽!!!!!

用正向引物和反向引物测序,结果比对不一致是怎么回事
猎豹截图20160326230659.png


用正向引物和反向引物测序,结果比对不一致是怎么回事-1
猎豹截图20160326230751.png


用正向引物和反向引物测序,结果比对不一致是怎么回事-2
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