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用正向引物和反向引物测序，结果比对不一致是怎么回事
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载体构建，把一段序列 连接在1300s-GFP载体上，用的是同源重组法，挑了单克隆以后选取了阳性进行测序。在插入的片段上游的载体上选择一段序列作为正向引物，在片段的下游载体上选择一段序列作为反向引物，进行测序。用正向引物的测序结果与序列比对有许多碱基匹配不上，而反向引物测序的结果却又能匹配上，是什么原因？ 测序的样品是质粒，这样的结果算构建成功了么？ 图片是是分别用正反向引物测序以后比对的结果。最后一张图示载体示意图，插入的序列紧挨 GFP的ATG，在ATG 和KpnⅠ之间。 求大神指教>0< 感激不尽！！！！！  猎豹截图20160326230659.png  猎豹截图20160326230751.png  图片1.png |
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