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圆加leaf

新虫 (小有名气)

[交流] 逆转录试剂盒和TA克隆试剂盒的区别是什么?

本人准备在大肠杆菌中转入一段基因,以表达某个蛋白使大肠杆菌能生产新的东西。在重组DNA时遇到困惑,想惊叫各位老师
已知这段基因的mRNA 序列,我看了文章后,是这么理解:扩增——凝胶电泳——回收PCR产物——转化到细菌——提质粒——测序,不知这么理解是不是对。我看到常用到两个试剂盒,一个是逆转录试剂盒,一个是TA克隆试剂盒,我想请问这两个试剂盒的差别是什么?用逆转录试剂盒加引物然后去转录机子扩展转录,得到的不就是扩增的吗,为什么还要再用TA克隆克隆,TA克隆试剂盒里是不是就有载体,有感受态细胞?
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物阜民康

新虫 (初入文坛)


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我这两周也刚开始做分子方面的实验,和你遇到问题差不多,似懂非懂,关注一下,看有木有大神指导。
2楼2016-03-24 16:02:32
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圆加leaf

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 物阜民康 at 2016-03-24 16:02:32
我这两周也刚开始做分子方面的实验,和你遇到问题差不多,似懂非懂,关注一下,看有木有大神指导。

没个会的人来教下,看文章也是看的各种晕晕的
3楼2016-03-24 16:17:01
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sandycool

铁虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
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圆加leaf: 金币+3 2016-03-28 11:06:31
逆转录只是把RNA反转录成cDNA,TA克隆是克隆的一个方法,把你扩增出来的目的片段切胶,回收,连接到载体,转化进入感受态细胞

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4楼2016-03-24 21:51:35
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maixiaodaou

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
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圆加leaf: 金币+3 2016-03-28 11:06:59
逆转录试剂盒,就是将mRNA反转录为cDNA,用来作为基因克隆,做PCR的模板。

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5楼2016-03-25 00:12:13
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maixiaodaou

新虫 (小有名气)

★ ★
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圆加leaf: 金币+1 2016-03-28 11:07:31
TA克隆就是一个简单的用来克隆的T载体,可以将你克隆出来的目的片段连接到这个载体上,热激转化到大肠感觉的感受态细胞中,这样可以保菌,保留你的目的基因,也可以用菌液提质粒用于测序

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6楼2016-03-25 00:14:48
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hua_geduo

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
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圆加leaf: 金币+3 2016-03-28 11:07:58
逆转录试剂盒是把你的RNA反转录为cDNA,便于操作;PCR扩增的片段一般会带有一个A碱基,但使用高保真酶除外,TA克隆是把你扩增的片段连接到载体上,然后转化
7楼2016-03-25 10:26:29
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云端试验室

新虫 (初入文坛)


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推荐  e生物圈  做实验外包  网站 www.ebioq.com

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8楼2016-03-26 11:18:07
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圆加leaf

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by maixiaodaou at 2016-03-25 00:14:48
TA克隆就是一个简单的用来克隆的T载体,可以将你克隆出来的目的片段连接到这个载体上,热激转化到大肠感觉的感受态细胞中,这样可以保菌,保留你的目的基因,也可以用菌液提质粒用于测序
...

那TA克隆试剂盒里一般会有配载体买,还是只有相应的那些试剂和方法而已?
9楼2016-03-28 14:02:29
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚:专业/专注/专心


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10楼2016-04-25 16:49:10
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