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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 逆转录试剂盒和TA克隆试剂盒的区别是什么？
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圆加leaf

新虫 (小有名气)

[交流] 逆转录试剂盒和TA克隆试剂盒的区别是什么？

本人准备在大肠杆菌中转入一段基因，以表达某个蛋白使大肠杆菌能生产新的东西。在重组DNA时遇到困惑，想惊叫各位老师
已知这段基因的mRNA 序列，我看了文章后，是这么理解：扩增——凝胶电泳——回收PCR产物——转化到细菌——提质粒——测序，不知这么理解是不是对。我看到常用到两个试剂盒，一个是逆转录试剂盒，一个是TA克隆试剂盒，我想请问这两个试剂盒的差别是什么？用逆转录试剂盒加引物然后去转录机子扩展转录，得到的不就是扩增的吗，为什么还要再用TA克隆克隆，TA克隆试剂盒里是不是就有载体，有感受态细胞？
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1楼 2016-03-24 15:48:35
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物阜民康

新虫 (初入文坛)
★
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我这两周也刚开始做分子方面的实验，和你遇到问题差不多，似懂非懂，关注一下，看有木有大神指导。
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2楼2016-03-24 16:02:32
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圆加leaf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 物阜民康 at 2016-03-24 16:02:32
我这两周也刚开始做分子方面的实验，和你遇到问题差不多，似懂非懂，关注一下，看有木有大神指导。

没个会的人来教下，看文章也是看的各种晕晕的
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3楼2016-03-24 16:17:01
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sandycool

铁虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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圆加leaf: 金币+3 2016-03-28 11:06:31
逆转录只是把RNA反转录成cDNA，TA克隆是克隆的一个方法，把你扩增出来的目的片段切胶，回收，连接到载体，转化进入感受态细胞

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4楼2016-03-24 21:51:35
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maixiaodaou

新虫 (小有名气)
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圆加leaf: 金币+3 2016-03-28 11:06:59
逆转录试剂盒，就是将mRNA反转录为cDNA，用来作为基因克隆，做PCR的模板。

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5楼2016-03-25 00:12:13
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maixiaodaou

新虫 (小有名气)
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圆加leaf: 金币+1 2016-03-28 11:07:31
TA克隆就是一个简单的用来克隆的T载体，可以将你克隆出来的目的片段连接到这个载体上，热激转化到大肠感觉的感受态细胞中，这样可以保菌，保留你的目的基因，也可以用菌液提质粒用于测序

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6楼2016-03-25 00:14:48
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hua_geduo

木虫 (正式写手)
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圆加leaf: 金币+3 2016-03-28 11:07:58
逆转录试剂盒是把你的RNA反转录为cDNA，便于操作；PCR扩增的片段一般会带有一个A碱基，但使用高保真酶除外，TA克隆是把你扩增的片段连接到载体上，然后转化
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7楼2016-03-25 10:26:29
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云端试验室

新虫 (初入文坛)
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8楼2016-03-26 11:18:07
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圆加leaf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by maixiaodaou at 2016-03-25 00:14:48
TA克隆就是一个简单的用来克隆的T载体，可以将你克隆出来的目的片段连接到这个载体上，热激转化到大肠感觉的感受态细胞中，这样可以保菌，保留你的目的基因，也可以用菌液提质粒用于测序
...

那TA克隆试剂盒里一般会有配载体买，还是只有相应的那些试剂和方法而已？
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9楼2016-03-28 14:02:29
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚：专业/专注/专心
★
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10楼2016-04-25 16:49:10
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