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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 逆转录试剂盒和TA克隆试剂盒的区别是什么？
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菜头Q

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
圆加leaf: 金币+10, 非常感谢！ 2016-04-26 09:18:56
我按照实验进行的思路跟你分享一下我的想法。
1.提取目的基因mRNA，用逆转录试剂盒进行逆转录，此时你得到是和你mRNA等量的cDNA.
2.根据mRNA的序列信息，用primer 5.0设计出特异性扩增引物对（考虑公司合成和到手时间，建议先做这个，最好一次做两组以上）。
3.用设计出来的特异性扩增引物对cDNA模板进行PCR扩增，这一步的步骤是为了扩增目的片段并加上与T载配对的A尾。
4.PCR产物可用PCR纯化试剂盒进行纯化。
5.纯化得到的PCR产物按照TA克隆试剂盒的体系进行连接转化，用PCR的方法筛选得到阳性重组子。
6.扩增阳性菌株，提质粒，送测序。测序结果符合预期的甘油保菌。
PS：逆转录试剂盒的作用是把RNA进行逆转录，得到与之互补的cDNA链。TA克隆试剂盒一般有T载体、感受态和鉴定引物，是为了帮助你在不用酶切的条件下得到阳性重组子，且该方法鉴定起来更简单，无需酶切，只看电泳结果就能一目了然。
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11楼2016-04-25 21:04:49
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