| 查看: 541 | 回复: 1 | |||
[求助]
求助大神看看我的引物有没有问题！
|
|
现在要扩增一个启动子片段，文献报道1208bp，按照序列设计了引物，分别在上下游引物加上了我所需要的酶切位点，模板是我提的真菌基因组，结果扩增出来的全是2400bp左右的，也有挺多非特异性的条带，我的marker是8000bp的。 我胶回收了2400bp的条带，拿酶进行了双酶切，切出来的大概在1000-1200，我想这应该是我要的启动子吧？ 可是再拿酶切产物做模板扩增，得到的全是非特异性的小片段。。1200左右的也有，但是好浅，其他的亮得很，如果切下来的是我的启动子那应该用我的引物可以P出全长1200啊，怎么全是小片段。。 所以请教一下： 1 我的引物是不是有问题？ 2 PCR扩增会出现产物二聚体的情况吗？ 下面贴上我的电泳图跟序列，拜托各位，感激不尽！！！！  胶回收启动子片段双酶切验证.jpg  目标启动子.jpg  双酶切产物为模板扩增启动子.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有90人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
|
GAGTGGGCAGAACACCAGAGCTGAAAGATGATAATGCTTGCCTTGGCTCAAATCGTTCATGACACCCATC TAGGCCATGGCGCCTGTAGAGCAGGTTACATTTCATGGCCGGTTAATCCGAATCCAGTGCTTGCACATGT AGCGCCACATGGTCTGTGCTATTCTATTCTGTGTTATAATAGTGTGATTTATTGCGTTTGGGCGTTTCAG TTGATTCGACTGGCCTTGCACATTACTCTCGCATTCCACAGCTGGCTGGAGGAGTTATCTTTACTTCTTC TTTGTGACTGTGGCTGCATGAGGCGCTTAGTATACTATCAGCTGATACTATGTTGAAACTGAATCACGGT GCTTGAAGGTCTGCGTGAAGTGGTTCATTGGGCTGTGATATTAACCGCAGCCTGTCTAGAACTATGACTA GACGGAGCGCCAAGAATGGACGACAACAGGAATACTGCCCAGCTAGCCACAGCTGAATCCTAAAGAAGTT TGCCAGCCCTCGTATTCCTATCCTGCATGGACGGCAACATTGCCCTGACGAGCTAAATTAGGCCGCAGCG CTAGTATTAGAATGAACTACGGTAGCAATGAGGGGAACGCCCACAAGCCAATTAAACGTCCCTTTCTTGA TATGACGGGCCTAGCCTTAATTACGGGGTACTGTGAGGACGTTGTGCCTGCTGCAATTGTCTATCCGTGC CGACGGTGTTGACAGCCACTAGCCATTCAGCTCGCCACACTTTCAACCCCACACCTCAAAGTAAGACCTA AACTTATTTTGGACTTCCTTGCAGCTACTATGCTGTCACTGTTATTTGACTGGACATGACATGCAGTATC ATGGCGCCAATAAAGAGAGTATCTCGAGAGTTTCATTGCATCGTAGGAAAGGCTTGCATTCCGGTGTTGC CGGGAAAGGGATCATTGGTAATGCGTAGTTGTTTTGTCTAGCTGTGATGCCGGGCTTTGATGGACGGAGG ACCTGGAGTGCAGCTCTTCATGCAAAGCCCGAGATAGACTGATTTGTAACATGTGTGATGCGTATCATTC ATTATCAATACGTCTCGTGGATATTTAAGAAGGGCGACAGTCGTGTGAATATCCGCTACTTCAAGTTCAA AACATCATTCCTACGAAAAGGAAAACCACAGCTTCCGCTTCAAAGCCCTAGTCAACACTAGTTCATCTTC TGATTACTTTGGTTCACA 以上是我的酪氨酸酶启动子序列 上游引物序列：AACTGCAGGAGTGGGCAGAACACCAGA 下游引物序列：GGGGTACCTGTGAACCAAAGTAATCAGAAG 分别加了pst1和kpn1酶切位点 各位帮忙看一下有没有问题啊  |
2楼2016-03-24 15:17:10