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[求助]
求助大神看看我的引物有没有问题！
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现在要扩增一个启动子片段，文献报道1208bp，按照序列设计了引物，分别在上下游引物加上了我所需要的酶切位点，模板是我提的真菌基因组，结果扩增出来的全是2400bp左右的，也有挺多非特异性的条带，我的marker是8000bp的。 我胶回收了2400bp的条带，拿酶进行了双酶切，切出来的大概在1000-1200，我想这应该是我要的启动子吧？ 可是再拿酶切产物做模板扩增，得到的全是非特异性的小片段。。1200左右的也有，但是好浅，其他的亮得很，如果切下来的是我的启动子那应该用我的引物可以P出全长1200啊，怎么全是小片段。。 所以请教一下： 1 我的引物是不是有问题？ 2 PCR扩增会出现产物二聚体的情况吗？ 下面贴上我的电泳图跟序列，拜托各位，感激不尽！！！！  胶回收启动子片段双酶切验证.jpg  目标启动子.jpg  双酶切产物为模板扩增启动子.jpg |
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2楼2016-03-24 15:17:10