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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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simona_s

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助大神看看我的引物有没有问题!

现在要扩增一个启动子片段,文献报道1208bp,按照序列设计了引物,分别在上下游引物加上了我所需要的酶切位点,模板是我提的真菌基因组,结果扩增出来的全是2400bp左右的,也有挺多非特异性的条带,我的marker是8000bp的。
我胶回收了2400bp的条带,拿酶进行了双酶切,切出来的大概在1000-1200,我想这应该是我要的启动子吧?
可是再拿酶切产物做模板扩增,得到的全是非特异性的小片段。。1200左右的也有,但是好浅,其他的亮得很,如果切下来的是我的启动子那应该用我的引物可以P出全长1200啊,怎么全是小片段。。
所以请教一下:
1 我的引物是不是有问题?
2 PCR扩增会出现产物二聚体的情况吗?
下面贴上我的电泳图跟序列,拜托各位,感激不尽!!!!

求助大神看看我的引物有没有问题!
胶回收启动子片段双酶切验证.jpg


求助大神看看我的引物有没有问题!-1
目标启动子.jpg


求助大神看看我的引物有没有问题!-2
双酶切产物为模板扩增启动子.jpg
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simona_s

新虫 (初入文坛)

GAGTGGGCAGAACACCAGAGCTGAAAGATGATAATGCTTGCCTTGGCTCAAATCGTTCATGACACCCATC
TAGGCCATGGCGCCTGTAGAGCAGGTTACATTTCATGGCCGGTTAATCCGAATCCAGTGCTTGCACATGT
AGCGCCACATGGTCTGTGCTATTCTATTCTGTGTTATAATAGTGTGATTTATTGCGTTTGGGCGTTTCAG
TTGATTCGACTGGCCTTGCACATTACTCTCGCATTCCACAGCTGGCTGGAGGAGTTATCTTTACTTCTTC
TTTGTGACTGTGGCTGCATGAGGCGCTTAGTATACTATCAGCTGATACTATGTTGAAACTGAATCACGGT
GCTTGAAGGTCTGCGTGAAGTGGTTCATTGGGCTGTGATATTAACCGCAGCCTGTCTAGAACTATGACTA
GACGGAGCGCCAAGAATGGACGACAACAGGAATACTGCCCAGCTAGCCACAGCTGAATCCTAAAGAAGTT
TGCCAGCCCTCGTATTCCTATCCTGCATGGACGGCAACATTGCCCTGACGAGCTAAATTAGGCCGCAGCG
CTAGTATTAGAATGAACTACGGTAGCAATGAGGGGAACGCCCACAAGCCAATTAAACGTCCCTTTCTTGA
TATGACGGGCCTAGCCTTAATTACGGGGTACTGTGAGGACGTTGTGCCTGCTGCAATTGTCTATCCGTGC
CGACGGTGTTGACAGCCACTAGCCATTCAGCTCGCCACACTTTCAACCCCACACCTCAAAGTAAGACCTA
AACTTATTTTGGACTTCCTTGCAGCTACTATGCTGTCACTGTTATTTGACTGGACATGACATGCAGTATC
ATGGCGCCAATAAAGAGAGTATCTCGAGAGTTTCATTGCATCGTAGGAAAGGCTTGCATTCCGGTGTTGC
CGGGAAAGGGATCATTGGTAATGCGTAGTTGTTTTGTCTAGCTGTGATGCCGGGCTTTGATGGACGGAGG
ACCTGGAGTGCAGCTCTTCATGCAAAGCCCGAGATAGACTGATTTGTAACATGTGTGATGCGTATCATTC
ATTATCAATACGTCTCGTGGATATTTAAGAAGGGCGACAGTCGTGTGAATATCCGCTACTTCAAGTTCAA
AACATCATTCCTACGAAAAGGAAAACCACAGCTTCCGCTTCAAAGCCCTAGTCAACACTAGTTCATCTTC
TGATTACTTTGGTTCACA
以上是我的酪氨酸酶启动子序列
上游引物序列:AACTGCAGGAGTGGGCAGAACACCAGA
下游引物序列:GGGGTACCTGTGAACCAAAGTAATCAGAAG

分别加了pst1和kpn1酶切位点

各位帮忙看一下有没有问题啊
2楼2016-03-24 15:17:10
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