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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » crispr/cas9敲除后验证
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18716248350

新虫 (小有名气)

[求助] crispr/cas9敲除后验证 已有2人参与

基因敲除后，验证用荧光筛选后，还要不要做surveyor错切酶法来检测？可不可以直接挑单克隆pcr与野生株比较片段长短，然后再测序？盼各位的回复
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1楼 2016-03-24 10:32:24
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huamao1113

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
18716248350: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-03-30 14:26:50
我们得到阳性后，就直接将靶点处的一段做PCR送测序验证，敲掉后一般都是测序验证吧…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2016-03-25 06:45:04
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jackie在努力

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
18716248350: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-03-30 14:27:08
我用CRISPR敲除的是大肠的基因，效率比RED重组要高，我建议是通过菌落PCR+测序验证，方便快捷
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16楼2016-03-29 16:05:25
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18716248350

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huamao1113 at 2016-03-25 06:45:04
我们得到阳性后，就直接将靶点处的一段做PCR送测序验证，敲掉后一般都是测序验证吧…

那样假阳性会不会很高，多测几次成本不会很高吗？

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3楼2016-03-25 09:32:42
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WOAIDACHANG

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4楼2016-03-27 01:10:11
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18716248350

新虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by WOAIDACHANG at 2016-03-27 01:10:11
楼主你是哪个学校的啊，为什么不用RED同源重组

我们老师说要用新技术！之前都没人做过，现在让我这个菜鸟搞，很恼火！

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5楼2016-03-27 09:46:17
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WOAIDACHANG

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6楼2016-03-27 11:38:08
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18716248350

新虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by WOAIDACHANG at 2016-03-27 11:38:08
你已经敲掉了吗
...

没呢，还在连sgRNA，因为在准备试剂，在纠结要不要买那个错切酶试剂盒。

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7楼2016-03-27 12:34:32
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WOAIDACHANG

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8楼2016-03-27 15:48:40
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18716248350

新虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by WOAIDACHANG at 2016-03-27 15:48:40
这个跟同源重组相比是不是更麻烦了。
...

我也不知道，同源重组也可以用错切酶来验证吧，应该差不多

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9楼2016-03-27 16:52:00
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WOAIDACHANG

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10楼2016-03-27 19:40:17
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