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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » crispr/cas9敲除后验证
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18716248350

新虫 (小有名气)
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10楼: Originally posted by WOAIDACHANG at 2016-03-27 19:40:17
PCR验证啊
...

pcr怎么验证，我敲除的片段很短，pcr跑出来可能跟野生株没什么区别
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11楼2016-03-27 20:53:08
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zhymhbu

木虫 (正式写手)
理论上pcr后测序。酶切检验最好

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微生物学-发酵工程-生化工程-生化与分子生物学-环境毒理学
12楼2016-03-27 21:51:08
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zhymhbu

木虫 (正式写手)
楼主做的什么菌。质粒是addgene买的？

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微生物学-发酵工程-生化工程-生化与分子生物学-环境毒理学
13楼2016-03-27 21:51:53
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18716248350

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by zhymhbu at 2016-03-27 21:51:08
理论上pcr后测序。酶切检验最好

你买过那个酶吗？在哪个公司买的？贵不贵啊？

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14楼2016-03-27 22:46:05
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18716248350

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by zhymhbu at 2016-03-27 21:51:53
楼主做的什么菌。质粒是addgene买的？

肺克，质粒是我老师去北京培训的公司买的

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15楼2016-03-27 22:46:45
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jackie在努力

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
18716248350: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-03-30 14:27:08
我用CRISPR敲除的是大肠的基因，效率比RED重组要高，我建议是通过菌落PCR+测序验证，方便快捷
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16楼2016-03-29 16:05:25
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同济shen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huamao1113 at 2016-03-25 06:45:04
我们得到阳性后，就直接将靶点处的一段做PCR送测序验证，敲掉后一般都是测序验证吧…

请问如何测序验证？我的测完序有一个碱基错配

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17楼2016-03-29 23:03:08
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18716248350

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by jackie在努力 at 2016-03-29 16:05:25
我用CRISPR敲除的是大肠的基因，效率比RED重组要高，我建议是通过菌落PCR+测序验证，方便快捷

哦哦，我也打算这样，因为我问了下那个酶好贵！我主要是突变的片段比较短，pcr出来可能和野生株没区别，怕假阳性高，你测了几次成功的啊？

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18楼2016-03-30 00:00:44
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18716248350

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by jackie在努力 at 2016-03-29 16:05:25
我用CRISPR敲除的是大肠的基因，效率比RED重组要高，我建议是通过菌落PCR+测序验证，方便快捷

嗯嗯，谢谢啊！我想问问你设计细菌的sgRNA是哪个网站设计的？

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19楼2016-03-30 13:36:31
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痞子无敌

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 18716248350 at 2016-03-27 09:46:17
我们老师说要用新技术！之前都没人做过，现在让我这个菜鸟搞，很恼火！
...

其实这样挺好的。。。。
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当你当你的眼睛眯着笑
20楼2016-05-21 11:04:21
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