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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩增时目的条带很暗~
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andyshang

木虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增时目的条带很暗~ 已有3人参与

这几天一直在从酵母基因组上P基因,结果P出来的目的条带很暗。
PCR用的酶是Primerstar，反应体系是50ul,加的模板量是3ul，DNTP 4ul,buffer 10ul,引物各1ul，水30ul,酶0.5ul，
反应程序：
98℃  5min,
98℃  15s,
50℃  30s,
72℃  1min30s
72℃  10min

PCR扩增时目的条带很暗~
Administrator 2016-03-23 11hr 59min.jpg
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1楼 2016-03-23 17:03:23
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yeruge

新虫 (小有名气)
做个温度梯度pcr

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2楼2016-03-23 17:29:42
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的上样孔比较亮，适当减少下模板。做个梯度PCR试试
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3楼2016-03-23 17:38:24
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不清楚你的循环数有多少，退火温度有点低，基因组做模板最好做个优化，体系里面模板量可以减少，酶量可以提高些，50微升体系可以分装两管各25微升进行扩增，祝好！

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
4楼2016-03-23 17:51:13
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310013

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=10109711&fpage=3
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5楼2016-03-23 18:35:39
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glove94

木虫 (小有名气)
循环数可以增加试试看

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6楼2016-03-27 18:02:09
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牛振鹏8888

木虫 (正式写手)

神
需要筛选温度

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专注科研
7楼2018-03-27 20:37:16
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