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andyshang

木虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增时目的条带很暗~ 已有3人参与

这几天一直在从酵母基因组上P基因,结果P出来的目的条带很暗。
PCR用的酶是Primerstar,反应体系是50ul,加的模板量是3ul,DNTP 4ul,buffer 10ul,引物各1ul,水30ul,酶0.5ul,
反应程序:
98℃  5min,
98℃  15s,
50℃  30s,
72℃  1min30s
72℃  10min

PCR扩增时目的条带很暗~
Administrator 2016-03-23 11hr 59min.jpg
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310013

金虫 (小有名气)

5楼2016-03-23 18:35:39
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yeruge

新虫 (小有名气)

2楼2016-03-23 17:29:42
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的上样孔比较亮,适当减少下模板。做个梯度PCR试试
3楼2016-03-23 17:38:24
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不清楚你的循环数有多少,退火温度有点低,基因组做模板最好做个优化,体系里面模板量可以减少,酶量可以提高些,50微升体系可以分装两管各25微升进行扩增,祝好!

发自小木虫Android客户端
天空才是极限,我有信心飞的更高!
4楼2016-03-23 17:51:13
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