10楼: Originally posted by 木小默1212 at 2016-03-21 19:33:17
这样的话引物的特异性和错配几率不久会很高吗？这样能得到我的目的基因么？...

6楼: Originally posted by 木小默1212 at 2016-03-21 19:30:15
用Prmier5设计的引物错配，发夹结构那些选项都是红色的，这个太危险了！...

12楼: Originally posted by 施子墨 at 2016-03-21 21:05:51
红的不一定P不出来～多合成几对试试。
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11楼: Originally posted by yvonne9044 at 2016-03-21 19:46:18
直接在引物上选就行，注意gc含量 退火温度，那个打分什么的六十来分的我都扩增成功过，二聚体，发夹啥的有时候避免不了
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12楼: Originally posted by 施子墨 at 2016-03-21 21:05:51
红的不一定P不出来～多合成几对试试。
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13楼: Originally posted by 施子墨 at 2016-03-21 21:06:37
自己手调一下引物长度，调整下GC含量
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14楼: Originally posted by 木小默1212 at 2016-03-21 21:21:34
我就担心一个问题，因为我的CDS区比较长，所以我就想提高引物的特异性，这样的话可以提高成功率，但是引物的那些选项是红的，这个我就不得不考虑了，选项就是评价一对引物的，而且不仅仅是在Primer5上设计的引物是 ...

8楼: Originally posted by 木小默1212 at 2016-03-21 19:32:00
用了Primer5，Oligo7和NCBI，但都没找到符合要求的引物！怎么直接在序列上选择呢，能否细说一下，谢谢！...

19楼: Originally posted by Bioexperixgs at 2016-03-21 22:55:54
看你用途了。这个方法不适合荧光定量引物，但如果你能确定扩增哪一部分序列的话，也可以用。一般在基因组中超过18个连续相同碱基的片段很少，当然有回文结构，重复序列结构的序列有可能非特异性条带。所以，只要引 ...