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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 引物设计
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gnot_nail

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
要克隆CDS？直接在CDS序列两端设计就行，什么发卡结构那些暂且不用管，Tm相差差不多就行，设计两队直接扩看效果。都不行的话，在CDS两端的5UTR和3UTR设计。另外你的基因在你选的模板材料上表达如何也影响你的扩增，这个组织材料不行可以换一个。
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21楼2016-03-21 23:09:27
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施子墨

金虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 木小默1212 at 2016-03-21 21:23:11
调整GC含量也想过，但是这样的话引物长度就会过短，影响到了引物的特异性了！...

根据需要调整呗、有时候调一下就不会全红了。不要考虑太多，引物合成也不贵～纠结来纠结去实验耽搁了

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22楼2016-03-22 08:40:39
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15729217609

铁虫 (初入文坛)
从两头取，按照引物设计原则自己动手设计。设计好根据你的载体加酶切位点，再加碱基保护。软件设计的不可靠。

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笑一笑没什么事过不了！
23楼2016-03-22 09:26:12
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木小默1212

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 施子墨 at 2016-03-22 08:40:39
根据需要调整呗、有时候调一下就不会全红了。不要考虑太多，引物合成也不贵～纠结来纠结去实验耽搁了
...

哎，就是考虑的太多才这么纠结，时间还是很紧的！
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24楼2016-03-22 14:14:19
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木小默1212

金虫 (初入文坛)
内容已删除
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25楼2016-03-22 14:15:57
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mlxmiao

木虫 (著名写手)
引用回帖:
21楼: Originally posted by gnot_nail at 2016-03-21 23:09:27
要克隆CDS？直接在CDS序列两端设计就行，什么发卡结构那些暂且不用管，Tm相差差不多就行，设计两队直接扩看效果。都不行的话，在CDS两端的5UTR和3UTR设计。另外你的基因在你选的模板材料上表达如何也影响你的扩增， ...

http://www.yeastgenome.org/cgi-bin/web-primer
http://primer3plus.com/cgi-bin/dev/primer3plus.cgi
2个很好用的在线引物设计软件

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26楼2016-03-22 14:50:28
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木小默1212

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
26楼: Originally posted by mlxmiao at 2016-03-22 14:50:28
http://www.yeastgenome.org/cgi-bin/web-primer
http://primer3plus.com/cgi-bin/dev/primer3plus.cgi
2个很好用的在线引物设计软件
...

谢谢！
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27楼2016-03-22 18:57:46
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
木小默1212: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-03-25 09:08:53
用Primer5设计的引物，没有连着8个以上碱基互补的都行。
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采菊东篱下，悠然见南山。
28楼2016-03-24 14:30:24
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木小默1212

金虫 (初入文坛)
好的，谢谢！
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29楼2016-03-25 09:08:57
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王爱沫1

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
30楼2016-03-25 10:17:58
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