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gnot_nail

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
要克隆CDS?直接在CDS序列两端设计就行,什么发卡结构那些暂且不用管,Tm相差差不多就行,设计两队直接扩看效果。都不行的话,在CDS两端的5UTR和3UTR设计。另外你的基因在你选的模板材料上表达如何也影响你的扩增,这个组织材料不行可以换一个。
21楼2016-03-21 23:09:27
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施子墨

金虫 (正式写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 木小默1212 at 2016-03-21 21:23:11
调整GC含量也想过,但是这样的话引物长度就会过短,影响到了引物的特异性了!...

根据需要调整呗、有时候调一下就不会全红了。不要考虑太多,引物合成也不贵~纠结来纠结去实验耽搁了

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22楼2016-03-22 08:40:39
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15729217609

铁虫 (初入文坛)

从两头取,按照引物设计原则自己动手设计。设计好根据你的载体加酶切位点,再加碱基保护。软件设计的不可靠。

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笑一笑没什么事过不了!
23楼2016-03-22 09:26:12
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木小默1212

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
22楼: Originally posted by 施子墨 at 2016-03-22 08:40:39
根据需要调整呗、有时候调一下就不会全红了。不要考虑太多,引物合成也不贵~纠结来纠结去实验耽搁了
...

哎,就是考虑的太多才这么纠结,时间还是很紧的!
24楼2016-03-22 14:14:19
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木小默1212

金虫 (初入文坛)

内容已删除
25楼2016-03-22 14:15:57
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mlxmiao

木虫 (著名写手)

引用回帖:
21楼: Originally posted by gnot_nail at 2016-03-21 23:09:27
要克隆CDS?直接在CDS序列两端设计就行,什么发卡结构那些暂且不用管,Tm相差差不多就行,设计两队直接扩看效果。都不行的话,在CDS两端的5UTR和3UTR设计。另外你的基因在你选的模板材料上表达如何也影响你的扩增, ...

http://www.yeastgenome.org/cgi-bin/web-primer
http://primer3plus.com/cgi-bin/dev/primer3plus.cgi
2个很好用的在线引物设计软件

发自小木虫Android客户端
26楼2016-03-22 14:50:28
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木小默1212

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
26楼: Originally posted by mlxmiao at 2016-03-22 14:50:28
http://www.yeastgenome.org/cgi-bin/web-primer
http://primer3plus.com/cgi-bin/dev/primer3plus.cgi
2个很好用的在线引物设计软件
...

谢谢!
27楼2016-03-22 18:57:46
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
木小默1212: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-03-25 09:08:53
用Primer5设计的引物,没有连着8个以上碱基互补的都行。
采菊东篱下,悠然见南山。
28楼2016-03-24 14:30:24
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木小默1212

金虫 (初入文坛)

好的,谢谢!
29楼2016-03-25 09:08:57
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王爱沫1

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

30楼2016-03-25 10:17:58
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