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zhangchong12

新虫 (小有名气)

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专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 重叠PCR 已有2人参与

求问，现在将2个3000bp左右的片段利用重叠PCR的方法连接在一块，因为怕连接不成功，中间重叠的片段就设计了大约200bp,我查看一般的重叠PCR大约都在20bp左右，想问一下，200bp重叠的片段进行重叠PCR靠谱吗，该怎样设置退获得温度？求大神指导下。

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1楼 2016-03-21 09:59:47

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hua_geduo

木虫 (正式写手)

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专业: 生物化学

【答案】应助回帖

看看Tm值，200bp估计会挺高的了，两步法吧，72度变性和延伸合为一步

4楼2016-03-24 16:47:56

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原海亮

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

你这200bp的引物设计起来，也是够不容易的吧，一般不需要这么长的

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天空才是极限，我有信心飞的更高！

2楼2016-03-21 12:11:09

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zhangbest007

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专业: 分子与进化生态学

用软件分析看看，退火，变性温度

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学无止境

3楼2016-03-21 12:33:55

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