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zhangchong12

新虫 (小有名气)

[求助] 重叠PCR 已有2人参与

求问,现在将2个3000bp左右的片段利用重叠PCR的方法连接在一块,因为怕连接不成功,中间重叠的片段就设计了大约200bp,我查看一般的重叠PCR大约都在20bp左右,想问一下,200bp重叠的片段进行重叠PCR靠谱吗,该怎样设置退获得温度?求大神指导下。
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这200bp的引物设计起来,也是够不容易的吧,一般不需要这么长的

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2016-03-21 12:11:09
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zhangbest007

木虫 (正式写手)

用软件分析看看,退火,变性温度

发自小木虫Android客户端
学无止境
3楼2016-03-21 12:33:55
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hua_geduo

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

看看Tm值,200bp估计会挺高的了,两步法吧,72度变性和延伸合为一步
4楼2016-03-24 16:47:56
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