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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于质粒构建的疑难问题，求指点！！！！
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siriusxuan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 海忆梦奇 at 2016-04-27 10:58:36
你好！想问一下，引物加酶切位点和保护碱基是如何选择的？苦恼好久了，求助大神！...

NEB有个手册，加入哪几个保护碱基后，酶切效率90%以上，
至于酶切位点的选择，首先是序列内部不能有，其次选常用的。
比如 BamH1 EcoR1 Pst1 Xho1. 又便宜又好用。
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
11楼2016-04-27 17:30:02
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Roman。雨天

新虫 (初入文坛)
建议你选择酶切之前用DNAMAN这个软件检测一下你的序列里有哪些酶切位点，是不是有已经包括了你要用来做酶切的酶。而且那个软件可以告诉你哪个位置有什么酶切位点，比如1352时有a酶切位点。。

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12楼2016-05-15 00:04:29
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jldu0606

铁杆木虫 (著名写手)
同样遇到了这样的问题！也是2000bp的基因，缺失了中间1500bp呢！您的问题后来解决了吗？
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13楼2017-02-28 09:43:42
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stormwmy

新虫 (小有名气)
目的基因里应该检查一下有没有酶切位点

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14楼2017-12-07 14:51:33
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