| 查看: 2057 | 回复: 13 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
关于质粒构建的疑难问题，求指点！！！！ 已有2人参与
|
||
请教质粒构建前辈~目前我想构建某一基因的表达载体，已从cDNA上成功调取该基因，目标基因的大小是2000bp，想要构建到VR1012（4900bp）这个真核表达载体上，使用PCR方法获得酶切位点然后连入双酶切的载体，PCR后核酸胶验证目标条带大小正确，胶回收，同时酶切载体胶回收，将目的基因的正义链与反义链退火（94℃ 10min, 25℃ 30min），连接载体，TOP10感受态转化后，挑单克隆，鉴定（双酶切以及菌液PCR）发现目标基因变短了！  测序发现基因变成了△975-1431nt缺失，少了456bp，反复了3次以上都是这样，请问各位大牛有人知道这种情况是如何造成的？有什么方法能避免，我用相同的方法构建了另外4个基因都没有这样的问题…… |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有163人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
jldu0606
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 9407.4
- 红花: 8
- 帖子: 1550
- 在线: 314.4小时
- 虫号: 333545
- 注册: 2007-03-28
- 专业: 微生物生理与生物化学
13楼2017-02-28 09:43:42
siriusxuan
木虫 (正式写手)
- 应助: 50 (小学生)
- 金币: 1830
- 散金: 207
- 红花: 7
- 帖子: 509
- 在线: 151.5小时
- 虫号: 1992629
- 注册: 2012-09-11
- 专业: 生物化学
2楼2016-03-21 00:02:37
兰兰园丁
木虫 (著名写手)
- 应助: 27 (小学生)
- 金币: 8437.1
- 散金: 162
- 红花: 13
- 沙发: 4
- 帖子: 2121
- 在线: 241.4小时
- 虫号: 2989280
- 注册: 2014-02-24
- 性别: GG
- 专业: 细胞、亚细胞结构与功能
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-03-21 08:43:48
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-03-21 08:43:48
|
最大的可能就是你酶切位点选的不对，基因内部可能还有一个位点，因此导致变短 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-03-21 00:10:09
star013 
新虫 (知名作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1488.5
- 散金: 831
- 红花: 33
- 帖子: 5395
- 在线: 493.3小时
- 虫号: 1401381
- 注册: 2011-09-14
- 专业: 法学
4楼2016-03-21 06:03:40
