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tkl0621

金虫 (小有名气)

[求助] 培养的多环芳烃细菌,最近送样去北京检测,pcr扩增无果 已有5人参与

各位同仁,年前培养的以多环芳烃为唯一碳源的细菌,本月初将甘油保存的菌种送去检测,那边告知我出来的结果不理想,干扰峰较多,不易区别,测样公司说是菌种受污染了或者没有纯化好;后面我又划线到固体平板上,包扎牢牢地给他们寄送过去,这次又让我吃惊地是pcr扩增不成功,工作人员说是细菌的细胞壁太厚造成失败了,我也是外行,不太懂这方面的知识,请大家帮我分析下,应该如何做?

培养的多环芳烃细菌,最近送样去北京检测,pcr扩增无果
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培养的多环芳烃细菌,最近送样去北京检测,pcr扩增无果-1
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培养的多环芳烃细菌,最近送样去北京检测,pcr扩增无果-2
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培养的多环芳烃细菌,最近送样去北京检测,pcr扩增无果-3
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1 PAHs degrader在实验过程中的的确确经常有杂菌
2 正确的做法是在PAHs 平板上长出来后,持续在R2A或者LB平板上分离纯化3-5次,获得的单菌落测试其降解能力,如果依然具有降解能力,就进行保种
3 测序的时候,自己做PCR, TA克隆,然后送去持续。很多人不喜欢用TA克隆测序,而习惯用PCR,我个人认为,这样不好!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

致良知
12楼2016-03-22 09:17:58
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tkl0621

金虫 (小有名气)

是扩增用的引物有问题呢还是我筛选的菌不单一造成的
2楼2016-03-20 13:02:56
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416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
自己培养。买dna提取试剂盒提dna自己pcr,把结果送去测序。现在的公司都乱来的。试剂盒可以用mp的土壤dna提取试剂盒。普通的dna提取专用试剂盒不好提

发自小木虫IOS客户端
做人做事要低调,默默践行心中的梦想.
3楼2016-03-20 13:13:09
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匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
4楼2016-03-20 16:01:02
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