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有没有做过巯基检测的？求教？ 已有1人参与
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我看原始文献1959那篇，写的是60 nm dtnb加大约2000 nm 巯基，我们做的大约60 nm 巯基加大约1000 nm DTNB，但是增加样品量，吸光度不变？但是标曲会随着样品量增加？有做过的吗？ 发自小木虫Android客户端 |
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5楼2016-03-21 15:48:17
永恒_99
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研究蛋白的氧化还原活性，我们选择谷胱甘肽为反应底物，氧化性谷胱甘肽GSH在还原剂的作用下被还原成GSSG，GSH能和5,5'二硫代双（2-硝基苯甲酸） DTNB反应生成黄色产物2-硝基-5-硫代苯甲酸（2-nitro-5-thiobenzoic acid）： （1）将表达出的蛋白充分混合后加入2.5 mM的GSH，在水浴锅30℃左右进行温浴反应30 min； （2）将DTNB加入到反应中，充分反应直到黄色物质稳定后，进行OD412检测； （3）以2.5mM GSH加入DTNB后反应生成2-nitro-5-thiobenzoic acid的OD412值（不加任何目的蛋白）为对照标准； （4）对比（2）和（3）之间OD412值的差异； 这是之前其他人做的实验 仅供参考 |
2楼2016-03-19 21:38:21
3楼2016-03-20 19:46:42
永恒_99
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4楼2016-03-20 20:02:55
